ПРЕКРАТИЛ ДЕЙСТВИЕ
в соответствии со статьей 36 Закона КР
от 20 июля 2009 года № 241
"О нормативных правовых актах Кыргызской Республики"Зарегистрировано в Министерстве юстиции Кыргызской Республики8 апреля 2002 года. Регистрационный номер 55-02 Утверждена приказом Министерства здравоохранения Кыргызской Республики от 11 марта 2002 года № 90 ИНСТРУКЦИЯ по контролю стерильности изделий медицинского назначения 1. Общие положения 1.1. Настоящая инструкция представляет собой свод правил по подго-товке и проведению в асептических условиях контроля стерильности изде-лий медицинского назначения, простерилизованных радиационным и газовымметодами в промышленных условиях, и воздушно-паровым методом в условияхлечебно-профилактических учреждений, а также учет и оценку результатовпроведенных исследований. 1.2. Инструкция по контролю стерильности изделий медицинского наз-начения предназначена для микробиологических и бактериологических лабо-раторий, аккредитованных на право осуществления контроля стерильности.Для предотвращения возникновения пирогенных реакций у больных стериль-ные изделия медицинского назначения должны также подвергаться исследо-ваниям на пирогенность и токсичность (ГФ XI том 2). 2. Термины и определения Асептика - условия и комплекс мероприятий, направленных на пре-дотвращение микробного и другого загрязнения. Стерилизация - процесс уничтожения на изделии или в изделии, илиудаление из объекта микроорганизмов всех видов, находящихся на всехстадиях развития, включая споры (физические и химические методы исредства). Стерильность - состояние полного отсутствия микроорганизмов всехвидов, находящихся на всех стадиях развития, включая споры. Дезинфекция - процесс уничтожения на изделии или в изделии, или наповерхности предметов вегетативных форм микроорганизмов (физические ихимические методы и средства). Бокс и предбоксник - территория микробиологической лаборатории,специально сконструированная, оборудованная и используемая таким обра-зом, чтобы снизить проникновение, образование и задержку в ней микроби-ологических и других загрязнений. Санитарная одежда - медицинский халат и шапочка, предназначенныедля защиты микробиологических посевов, питательных сред, стерильной ла-бораторной посуды от дополнительных микробиологических и других загряз-нений, выделяемых персоналом. Питательные среды - питательный субстрат для культивирования мик-роорганизмов. Метод прямого посева - посев образцов изделий медицинского назна-чения или смывов с них непосредственно в питательные среды в асептичес-ких условиях. Метод мембранной фильтрации - фильтрование смывов с образцов меди-цинского назначения в асептических условиях с помощью вакуума через од-ну или несколько мембран с дальнейшим посевом мембран в питательныесреды. 3. Требования к помещению для посева на стерильность изделий медицинского назначения 3.1. Контроль стерильности простерилизованной продукции проводятпри условиях, исключающих возможность вторичной контаминации, в специ-ально оборудованных помещениях с соблюдением правил асептики. 3.2. Посев исследуемого материала желательно проводить в настоль-ных боксах с ламинарным потоком воздуха. Эти боксы размещают в отдель-ных помещениях микробиологической лаборатории. При отсутствии боксов сламинарным потоком воздуха контроль стерильности проводят в боксирован-ных помещениях (бокс с предбоксником). Общая площадь бокса должна бытьне менее 3 кв.м. Боксы представляют собой изолированные помещения дляпроведения в них работы в асептических условиях. Боксы должны быть хо-рошо освещены. Внутреннее устройство боксов должно обеспечивать легкость и надеж-ность поддержания чистоты и возможность дезинфекционной обработки. Сэтой целью водопроводные трубы, а также электропроводку размещают внебокса или в толще его стен. Отопительные батареи устанавливают гладкимибез ребер, что препятствует осаждению пыли. Стены бокса на высоту неменее полутора метров от пола облицовывают плиткой или, как и потолок,окрашивают в светлые тона масляной краской. Полы покрывают плиткой илилинолеумом с обязательной сваркой швов. Такая отделка поверхностей поз-воляет использовать при уборке помещения дезинфицирующие растворы. Вбоксе должно находиться минимальное количество мебели; стол, табуретыили жесткие стулья, покрытые материалами, легко подвергающимися дезин-фекционной обработке. К боксу должен примыкать предбоксник, отделенный от него перего-родкой с дверью - помещение, куда вносят подготовленные для посева об-разцы, питательные среды, пипетки и биксы со стерильными халатами, кол-паками, марлевыми повязками (масками), бахилами. В предбокснике персо-нал переодевается в стерильную одежду и специальную обувь для бокса.Перед входом в предбоксник помещают матерчатый или губчатый коврик, ув-лажненный 3% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором универсально-го моющего средства или 0,75% раствором хлорамина Б с 0,5% растворомуниверсального моющего средства для протирания обуви. К предбокснику должна примыкать комната, где хранятся питательныесреды, необходимые для проведения контроля стерильности, стерильная по-суда. В боксированном помещении стены должны быть окрашены маслянойкраской или выложены кафельной плиткой, не должны иметь выступов, кар-низов, щелей, трещин. 3.3. В боксе и предбокснике устанавливают настенные (ОБН) и пото-лочные (ОБП) ультрафиолетовые облучатели из расчета 2 Вт удельной мощ-ности ламп, создающих прямое излучение на 1 кв.м помещения. Облучателиразмещают на высоте 2-2,5 м от пола. Примечание: в боксах работа с живыми микробными культурами не до-пускается. 4. Подготовка помещения, инструментов, посуды и специальной одежды к посеву на стерильность 4.1. Ежедневно до проведения работы помещения бокса и предбоксникаподвергают тщательной обработке. Стены, пол, поверхности инвентаря про-тирают 3% раствором перекиси водорода с 0,5% универсального моющегосредства. Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают так же,как и помещение бокса. Через 45-60 минут после обработки в бокс вносятвсе необходимые для работы материалы и инструменты, кроме образцов из-делий. 4.2. До начала работы в боксе и предбокснике на 1-1,5 часа включа-ют ультрафиолетовые облучатели. Работа в боксе осуществляется не менеечем через 15 минут после отключения ультрафиолетовых облучателей. 4.3. Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе пред-варительно стерилизуют в паровом стерилизаторе. Металлические, стеклян-ные и тканевые изделия обрабатывают при следующем режиме: температура132 град. Цельсия +/- 2 град. Цельсия, время стерилизационной выдержки20 минут, изделия из резины (перчатки и т.д.) - при температуре 120град. Цельсия +/- 2 град. Цельсия в течении 45 минут. В процессе работывспомогательный инструмент 2-3 раза заменяют новым стерильным комплек-том. 4.4. Перед входом в предбоксник работники лаборатории тщательномоют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным полотен-цем, надевают в предбокснике стерильные халаты, 4-х слойные маски, ша-почки, на руки - стерильные перчатки, на ноги - бахилы. 5. Микробиологический контроль воздуха бокса 5.1. В процессе посева в боксе регулярно проверяют обсемененностьвоздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки Петри с простым пита-тельным агаром, открывая их на 15 минут, затем их помещают в термостатпри температуре 37 град. Цельсия на 48 часов. Допускается рост не более трех колоний неспорообразующих сапрофи-тов. В случае роста на чашках более 3 колоний проведение дальнейших ра-бот в данном боксе запрещается, в нем дополнительно проводят тщательнуюобработку 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющих средств. 6. Приготовление дезинфицирующих растворов и правила пользования растворами перекиси водорода 6.1. Приготовление растворов комплекса перекиси водорода с универ-сальными моющими средствами проводят в соответствии с расчетом, приве-денным в таблице.-----------------------------------------------------------------------| Состав рабочего | Количество пергидроля, воды, моющего средства, || раствора | необходимое для приготовления 1 л раствора ||-----------------|---------------------------------------------------|| Концентрация | Пергидроля в зависимости от |Воды|Моющего || в процентах |концентрации в нем перекиси водорода |в мл|средства||-----------------|-------------------------------------| | в г ||Перекиси|Моющего |Концентрация перекиси| Количество | | ||водорода|средства|водорода в пергидроле|пергидроля в мл| | || | | в процентах |на 1 л раствора| | ||--------|--------|---------------------|---------------|----|--------|| 3,0 | 0,5 | 30,0 | 100 |895 | || | | 31,0 | 97 |898 | || | | 32,0 | 94 |901 | 5 || | | 33,0 | 90 |905 | || 6,0 | 0,5 | 30,0 | 200 |795 | || | | 31,0 | 194 |801 | || | | 32,0 | 188 |807 | 5 || | | 33,0 | 180 |815 | |----------------------------------------------------------------------- При приготовлении раствора пергидроль приливают к раствору моющегосредства ГОСТ 25644-96 "Средства моющие синтетические порошкообразные".При отсутствии возможности использовать дезинфицирующий раствор, произ-водят обработку горячим (50-60 град.) мыльно-содовым раствором (1%раствора соды или стирального порошка и 0,5% нашатырного спирта) с пос-ледующим протиранием стен, полов, мебели 2% раствором хлорамина Б. 6.2. При приготовлении растворов перекиси водорода и работе с 6%растворами руки защищают резиновыми перчатками, а глаза - герметичнымиочками. При попадании пергидроля на кожу или в глаза их немедленно про-мывают обильным количеством водопроводной воды. При несоблюдении ука-занных правил техники безопасности могут развиться дерматиты и конъюк-тивиты. Запасы препарата хранят в местах, недоступных для общего поль-зования, в темной посуде, желательно при температуре +4 град. Цельсия. 7. Персонал 7.1. В микробиологической лаборатории должно быть необходимое ко-личество персонала, имеющего соответствующее образование, владеющегометодикой посева образцов изделий медицинского назначения на стериль-ность, умеющего качественно провести подготовительный этап и профессио-нально оценить результаты посева. 7.2. В функционально-должностных обязанностях микробиологическойлаборатории должны быть отражены профессиональные задачи (права и обя-занности) всех сотрудников, в том числе руководящего персонала, и об-ласти их ответственности. 8. Отбор проб изделий медицинского назначения 8.1. Отбор проб для контроля стерильности изделий медицинскогоназначения на промышленных предприятиях осуществляется по ГОСТ Р51148-98 "Изделия медицинские. Требования к образцам и документации,представляемым на токсикологические, санитарно-химические испытания,испытания на стерильность и пирогенность". 8.2. Отбор проб для контроля стерильности и пирогенности изделиймедицинского назначения, ввозимых в республику, осуществляется в соот-ветствии с приведенной таблицей.-----------------------------------------------------------------------|Наименование|Количество изделий|Количество изделий|Количество изделий|| изделий | медицинского | медицинского | медицинского ||медицинского| назначения в | назначения в | назначения в || назначения | партии до 10000 |партии от 10000 до| партии от 100000 || | включ. | 100000 включ. | и выше || |------------------|------------------|------------------|| |Количество изделий|Количество изделий|Количество изделий|| | медицинского | медицинского | медицинского || | назначения, | назначения, | назначения, || | отбираемое для | отбираемое для | отбираемое для || | контроля | контроля | контроля || |------------------|------------------|------------------|| |Пер- |Пов- |Арбит-|Пер- |Пов- |Арбит-|Пер- |Пов- |Арбит-|| |вич- |тор- |раж- |вич- |тор- |раж- |вич- |тор- |раж- || |ного |ного |ного |ного |ного |ного |ного |ного |ного || |конт-|конт-|хра- |конт-|конт-|хра- |конт-|конт-|хра- || |роля |роля |нения |роля |роля |нения |роля |роля |нения ||------------|-----|-----|------|-----|-----|------|-----|-----|------||Шприцы, иглы| 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||однократного| | | | | | | | | ||применения | | | | | | | | | ||Перчатки | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||резиновые | | | | | | | | | ||хирургичес- | | | | | | | | | ||кие | | | | | | | | | ||однопутного | | | | | | | | | ||применения | | | | | | | | | ||Шовный и | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||перевязочный| | | | | | | | | ||материал | | | | | | | | | ||Устройства | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||комплектные | | | | | | | | | ||эксфузион- | | | | | | | | | ||ные, | | | | | | | | | ||трансфузион-| | | | | | | | | ||ные и | | | | | | | | | ||инфузионные | | | | | | | | | ||Катетеры | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||однократного| | | | | | | | | ||применения | | | | | | | | | ||Контрацепти-| 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||вы | | | | | | | | | ||Системы для | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 2 | 14 | 28 | 4 ||взятия крови| | | | | | | | | ||однократного| | | | | | | | | ||применения | | | | | | | | | ||Зонды из | 6 | 12 | 2 | 8 | 16 | 2 | 10 | 20 | 4 ||полимерных | | | | | | | | | ||материалов | | | | | | | | | ||Контейнеры | 8 | 16 | 2 | 10 | 20 | 2 | 12 | 24 | 4 ||полимерные | | | | | | | | | ||для | | | | | | | | | ||компонентов | | | | | | | | | ||крови | | | | | | | | | ||Другие | 6 | 12 | 2 | 8 | 16 | 2 | 10 | 20 | 4 ||изделия | | | | | | | | | ||медицинского| | | | | | | | | ||назначения | | | | | | | | | |----------------------------------------------------------------------- 9. Контроль стерильности образцов изделий медицинского назначения путей прямого метода посева 9.1. Для контроля стерильности образцов изделий медицинского наз-начения используют следующие питательные среды: - тиогликолевую среду; - бульон Сабуро. 9.2. При посеве изделия или его части непосредственно в питатель-ную среду количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.д.) должнобыть достаточным для полного погружения изделия или его части. 9.3. Посевы с тиогликолевой средой выдерживают в термостате притемпературе 30-35 град. Цельсия, с бульоном Сабуро - при температуре 22град. Цельсия +/- 2 град. Цельсия. Посевы инкубируют в течении 14 суток при прямом методе посева и 7суток при методе мембранной фильтрации. Описание состава, способа при-готовления и контроля стерильности питательных сред, используемых приконтроле стерильности изделий медицинского назначения, изложены в раз-деле 13. 9.4. На пробирках и колбах с посевами делают на этикетках или ка-рандашом по стеклу надписи с указанием даты посева, N партии (серии), Nобразца и N пробирки (колбы, флакона). 9.5. Методика посева на стерильность различных изделий, выпускае-мых промышленностью, имеет специфические особенности. Описание некото-рых методик приводится в п.п. 9.7-9.35. По мере освоения выпуска другихстерилизованных изделий этот раздел должен быть дополнен. 9.6. При контроле продукции, простерилизованной на предприятии-из-готовителе, в предбокснике наружную упаковку исследуемых изделий проти-рают с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, смоченной 6%раствором перекиси водорода или 70 град. этилового спирта, и оставляютна стерильном лотке на 30 минут, затем ее разрезают и изделие во внут-ренней упаковке переносят в бокс, где осуществляется посев. 9.7. Посев на стерильность ГОСТ 25047-87 "Устройств комплектных,эксфузионных, инфузионных и трансфузионных однократного применения". Впакет наливают 25-30 мл стерильного физ. раствора, ополаскивают внут-реннюю поверхность пакета и наружную поверхность системы, из пакетастерильной пипеткой отбирают часть физ. раствора, который по 2 мл засе-вают в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и 2 пробирки с 10 млбульона Сабуро. Не извлекая систему из пакета, стерильными ножницами снимают за-щитный колпачок с иглы, отрезают иглу и опускают в пробирку с 10 мл са-харного бульона. Вводят в систему стерильный физ. раствор, промываютее, после промывания обрезают противоположный конец системы с иглой ивыливают по 1 мл пробирки с 10 мл указанных питательных сред. На каждуюсреду берут по 2 пробирки. 9.8. Посев на стерильность систем для взятия крови, систем длярастворения сухих лекарственных препаратов, систем-магистралей для пе-реливания раствора из флакона во флакон. Стерильным пинцетом извлекают изделие из упаковки. Снимают колпач-ки, отрезают иглы, нарезают трубки на части длиной 2-3 см и погружаютвсе изделие во флакон (колбу) с тиогликолевой средой. Второе изделиезасевают на бульон Сабуро. Таким образом для посевов отбирают количест-во изделий, кратное 2. 9.9. Посев на стерильность контейнеров полимерных для крови оди-нарных 500 мл однократного применения. Освобождают изделие в предбокснике от внутренней упаковки, проти-рают наружную поверхность контейнера 6% раствором перекиси водорода или70 град. этилового спирта укладывают на стерильный лоток, укрывают вто-рым стерильным лотком, после заполнения лотка контейнерами его вносят вбокс и оставляют на 30 минут, после чего проводят посев консерванта настерильность. При наличии шариков в контейнере их выдавливают из основания труб-ки, тщательно ополаскивают внутреннюю поверхность контейнера, передав-ливая консервант в трубки и обратно в контейнер. Затем снимают колпачокс иглы и через иглу надавливанием на контейнер, расположенный верти-кально основанием вверх, свернув всю свободную от консерванта частьконтейнера, вытесняют около 2,5 мл консерванта в 2 пробирки с 10 млбульона Сабуро и 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды. При наличии вконсерванте антибиотика засевают по 2,5 мл консерванта в 2 флакона со100 мл тиогликолевой среды и 2 флакона со 100 мл бульона Сабуро. Штуцера в предохранительной оболочке срезают стерильными ножница-ми, желательно изогнутыми, извлекают штуцер пинцетом из предохранитель-ной оболочки и помещают в пробирку с 10 мл тиогликолевой среды. 9.10. Посев на стерильность контейнеров полимерных с консервантомдля крови и ее компонентов сдвоенных 500/300 мл однократного примене-ния. Подготовку изделий к посеву проводят в соответствии с п.9.9. Перед посевом тщательно ополаскивают консервантом обе секции кон-тейнера, переливая его через соединительную трубку. При наличии в изде-лии шариков перед посевом выдавливают их в контейнер. Посев консерванта проводят в соответствии с п.9.9. 9.11. Посев на стерильность упакованных пакетов для контейнеровполимерных с консервантом для крови одинарных 500 мл однократного при-менения контейнеров полимерных с консервантом для крови и ее компонен-тов сдвоенных 500/300 мл однократного применения. В упакованный пакет наливают 25-30 мл стерильного физиологическогораствора. Тщательно ополаскивают им внутренние стенки пакета. Затем пи-петкой сеют по 2,0 мл физиологического раствора в 2 пробирки с 10 млтиогликолевой среды и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро. 9.12. Посев на стерильность контейнеров полимерных для компонентовкрови одинарных 300 мл однократного применения. Освобождают изделие от наружного упаковочного пакета. Во внутрен-ний упаковочный пакет наливают 25-30 мл стерильного физиологическогораствора, тщательно ополаскивают внутреннюю поверхность пакета и наруж-ную поверхность контейнера. Из пакета пипеткой засевают по 1-2 мл физи-ологического раствора в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и 2 про-бирки с 10 мл бульона Сабуро. Затем извлекают контейнер, снимают с иглы защитный колпачок, отре-зают иглу вместе с полимерным фиксатором и опускают ее в пробирку (фла-кон) с 10 мл тиогликолевой среды. Вводят через эту трубку пипеткой Мора(или шприцем) 25-30 мл стерильного физиологического раствора и туго за-вязывают узлом трубку. Тщательно ополаскивают внутренние стенки контей-нера. Затем отрезают трубку ниже узла и надавливанием на контейнер вы-тесняют через трубку 1-2 мл физиологического раствора в 2 пробирки с 10мл тиогликолевой среды и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро. 4.13. Посев на стерильность контейнеров полимерных для компонентовкрови сдвоенных 300/300 мл однократного применения. Подготовку изделий к посеву проводят в соответствии с п.9.11. Перед посевом тщательно ополаскивают одну, а затем другую секциюконтейнера 25-30 мл физиологического раствора, введенного в него черезтрубку после обрезки иглы и посева ее. Физиологический раствор передав-ливают из секции в секцию через соединительную трубку. При наличии визделии шариков их выдавливают в контейнер перед ополаскиванием. Посев физиологического раствора проводят в соответствии с п.9.12. 9.14. Посев на стерильность комплектов полимерных мешков для хра-нения сухих кровезаменителей. Перед предбоксником наружную упаковку комплекта полимерных мешковпротирают с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, смоченной3% раствором перекиси водорода, или 70 град. этилового спирта, кладутна стерильный лоток, накрывают стерильной бумагой и вносят в предбокс-ник, где оставляют на 30 минут. Затем бумагу снимают, разрезают наруж-ную упаковку, вынимают комплект полимерных мешков помещают их на сте-рильный лоток и переносят в бокс. В боксе вынимают полимерный мешок пипеткой Мора наливают в него25-30 мл стерильного физиологического раствора, ополаскивают внутреннююповерхность мешка. Затем стерильной пипеткой отбирают 6 мл физиологи-ческого раствора, который по 2 мл засевают в 2 пробирки с 10 мл тиогли-колевой среды и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро. 9.15. Посев на стерильность полимерных емкостей разового использо-вания для замораживания биопродуктов и хранения их в замороженном сос-тоянии при температуре -196 град. Цельсия (типа "Гемофлекс"). В упаковку (пакет) наливают 25-30 мл стерильного физиологическогораствора, ополаскивают внутреннюю поверхность пакета и наружную поверх-ность емкости. Из упаковки (пакета) стерильной пипеткой отбирают частьфизиологического раствора, который по 2 мл засевают в 2 пробирки с 10мл тиогликолевой средой и в 2 пробирки с 10 мл бульоном Сабуро. Вынима-ют мешок и, срезав верхнюю часть одной трубки заливают в нее пипеткой25-30 мл стерильного физиологического раствора, тщательно ополаскиваютим внутренние поверхности емкости, затем располагают емкость основаниемвверх и, свернув всю свободную от физиологического раствора часть, вы-тесняют небольшое количество раствора (по 1-2 мл) в 2 пробирки с каждойиз перечисленных сред. 9.16. Посев на стерильность катетеров внутривенных. Снимают колпачки, отрезают иглы, нарезают трубку на части длиной2-3 см, погружают все изделие во флакон (колбу) с тиогликолевой средой.Второе изделие засевают на бульон Сабуро. Таким образом для посевов от-бирают количество изделий, кратное двум (п.9.18). 9.17. Посев на стерильность катетеров: носовых детских, пупочныхдетских, носоглоточных, кишечных, ректальных, эндобронхотрахеальных,эпидуральных, лоханочных, почечно-полостных, риноларингологических гор-танных, уретральных, мочеточниковых, катетеров для обменного перелива-ния крови, для искусственного вскармливания новорожденных, подключич-ных. Стерильным пинцетом извлекают изделие из упаковки. При наличии визделии металлических вводных устройств (стилетов и т.д.) необходимо ихвынуть непосредственно перед посевом. Затем изделие стерильными ножни-цами разрезают на равные части длиной 3-5 см. Если позволяют размерыизделия, его разрезают внутри упаковки. Части изделия в равном коли-честве погружают в 2 колбы с тиогликолевой средой и бульоном Сабуро.При наличии в изделии одной иглы, резиновой трубки или канюли (катетерэпидуральный, носовой, подключичный и др.) их погружают в тиогликолевуюсреду. 9.18. Посев на стерильность игл для родничковой пункции. Извлекают изделие из упаковки, отрезают иглу, разрезают оставшуюсячасть изделия на кусочки размером 3-5 см и погружают все изделие вофлакон (колбу) с питательной средой. Одно изделие полностью засевают натиогликолевую среду, второе - на бульон Сабуро. Для посевов отбираютколичество игл для родничковой пункции, кратное двум (2, 4, 6 и т.д.). 9.19. Посев на стерильность катетеров для длительных внутривенныхвливаний. Извлекают изделие из упаковки стерильным пинцетом, вынимают иглу иопускают ее во флакон (колбу) с питательной средой. Туда же раздельноопускают пластиковый катетер и защитный колпачок. Одно изделие пол-ностью засевают на тиогликолевую среду, второе - на бульон Сабуро. Дляпосевов отбирают количество изделий кратное двум (п.9.18). 9.20. Посев на стерильность зондов дуоденальных из полимерных ма-териалов, зондов желудочных, трубок интубационных различных номеров. Вскрывают упаковку и стерильным пинцетом извлекают изделие. Сте-рильными ножницами разрезают трубку на равные части длиной 3-5 см ипогружают их в равном количестве в два флакона с тиогликолевой средой ибульоном Сабуро. 9.21. Посев на стерильность электродов эндокардиальных монополяр-ных для временной стимуляции сердца, эндокардиальных для постояннойстимуляции сердца, миокардиальных монополярных для постоянной стимуля-ции сердца. В предбокснике вынимают изделие в упаковке из коробки, обрабатыва-ют упаковку в соответствии с п.9.6 вносят изделие в бокс. В боксе сте-рильными ножницами освобождают изделие от упаковки и удаляют вводноеустройство (стилет) при его наличии. Изделие разрезают стерильными ост-рыми ножницами на отрезки длиной 3-5 см и все их погружают во флакон спитательной средой. Для посева отбирают количество изделий кратное двум(п.9.18). 9.22. Посев на стерильность имплантируемых стимуляторов сердца. Стерильными ножницами разрезают внутреннюю упаковку, руками в сте-рильных перчатках извлекают стимулятор. В течении 30 секунд протираютповерхность стимулятора стерильной, смоченной в стерильном физиологи-ческом растворе марлевой салфеткой (размером 5х5 см), которую помешаютв пробирку с 15 мл физиологического раствора и встряхивают в шут-тель-аппарате в течение 10 минут. Затем стерильной пипеткой отбираютфизиологический раствор и засевают его по 2 мл в 2 пробирки с 10 млкаждой из сред (п.13). 9.23. Посев на стерильность манжеток для новорожденных. Из упаковки стерильным пинцетом извлекают изделие и помещают вколбу с 50 мл физиологического раствора. Колбу с изделием встряхиваютна шуттель-аппарате в течении 10 минут. По окончании встряхивания изколбы стерильно извлекают пипеткой физиологический раствор и засеваютего по 2 мл в пробирки с тиогликолевой средой и бульоном Сабуро. Объемпитательной среды в пробирках по 10 мл. 9.24. Посев на стерильность насадочных частей автоматических шпри-цев. Перед посевом наружную поверхность отобранных образцов насадочныхчастей автоматических шприцев протирают стерильными салфетками, смочен-ными 6% раствором перекиси водорода или 70 град. этилового спирта. Сте-рильным пинцетом открывают крышку насадочной части и далее стерильнойиглой или металлическим стержнем прорывают тонкий участок дна чехла ивыталкивают содержимое в стерильный сосуд, производят посев содержимогопо 2 мл в 2 пробирки с 10 мл каждой из сред, указанных в п.9.1. С по-мощью стерильного пинцета отсоединяют иглу с иглодержателем от капсулыи помещают в пробирку с тиогликолевой средой. 9.25. Посев на стерильность шприцев однократного применения. Стерильными ножницами вскрывают упаковку и с помощью пинцета изв-лекают поочередно поршень шприца, придерживая цилиндр в упаковке, затемцилиндр и иглы (при их наличии). Все указанные части шприца погружают водин флакон (колбу) с питательной средой. Для посева отбирают количест-во изделий кратное двум (п.9.18). 9.26. Посев на стерильность игл инъекционных разового использова-ния. Ножницами отрезают одну секцию упаковки с одной иглой. Стерильныминожницами вскрывают упаковку со стороны входа иглы из колпачка и с по-мощью пинцета извлекают поочередно иглу, придерживая колпачок в упаков-ке затем извлекают колпачок и погружают их в одну пробирку (флакон) спитательной средой. Для посева отбирают количество изделий, кратноедвум (п.9.18). 9.27. Посев на стерильность клипс нейрохирургических, игл инъекци-онных трубчатых к шприцам, съемных лезвий для скальпеля, пульпоэкстрак-торов, копий-скарификаторов для прокола пальца, скобок танталовых длясшивающих аппаратов, боров зубных. Стерильными ножницами вскрывают упаковку с помощью пинцета извле-кают изделие и погружают его в пробирку с питательной средой. Для посе-ва отбирают количество изделий, кратное двум (п.9.18). 9.28. Посев на стерильность спиц для скелетного вытяжения. Стерильными ножницами вскрывают упаковку и стерильным пинцетом вы-нимают изделие из упаковки. Стерильной марлевой салфеткой, смоченной встерильном физиологическом растворе (размер салфетки 5х5 см, на смачи-вание одной салфетки требуется 0,5 мл раствора), тщательно протираютизделие в течении 30 сек. И затем полностью погружают салфетку в тиог-ликолевую среду. Смывы с других изделий соответственно погружают вбульон Сабуро. Таким образом для посева отбирают количество изделийкратное двум (п.9.18). 9.29. Посев на стерильность игл атравматических с шовным материа-лом. Разрезают внутреннюю упаковку, стерильным пинцетом извлекают иглуиз пакета. Поместив изделие в стерильную чашку Петри, перегибают бумагупоперек расположения шовного материала, снимают иглу и нить с этикеточ-ной бумаги. Далее осторожно с помощью двух пинцетов захватывают изделиеи помешают в пробирку с тиогликолевой средой. Следующее изделие помеща-ют в бульон Сабуро. Для посевов на стерильность отбирают количество из-делий кратное двум. 9.30. Посев на стерильность контрацептивов полиэтиленовых. Стерильными ножницами срезают часть упаковки и стерильным пинцетомвынимают изделие. Затем режут изделие на две равные части и каждую изних погружают соответственно в пробирку с тиогликолевой средой и буль-оном Сабуро. 9.31. Посев на стерильность липкой полимерной пленки для закрытияоперационного поля. Вскрывают упаковку, с помощью стерильного пинцета извлекают пленкуиз упаковки. От каждой пленки, не разворачивая ее, стерильными ножница-ми отрезают 2 полоски шириной около 1 см и длиной около 4 см (ширинаотрезаемой полоски должна быть немного меньше диаметра используемой дляпосева пробирки). От вырезанных полосок отделяют липкую полимерноюпленку, опускают ее и бумагу-подложку в одну широкую пробирку (флакон).Посев проводят на 2 питательные среды (п.9.1). 9.32. Посев на стерильность перевязочного материала. Стерильными ножницами разрезают упаковку, пинцетом вынимают иссле-дуемый материал. Затем разрезают изделие с помощью стерильных ножниц ипомещают в пробирки с питательными средами. Часть изделия засевают втиогликолевую среду, другую - в бульон Сабуро. После посева пробиркитщательно встряхивают до полного погружения исследуемого материала впитательную среду и помещают в термостат. 9.33. Посев на стерильность чашек Петри пластмассовых различногодиаметра. Стерильными ножницами вскрывают упаковку, извлекают чашки Петри,помещают ее на стерильный лоток. 2/3 объема чашки заполняют стерильнымфизиологическим раствором, закрывают чашку крышкой и несколько раз вра-щают круговыми движениями в горизонтальном направлении. Затем отбираютфизиологический раствор пипеткой и по 2 мл его засевают в 2 пробирки стиогликолевой средой и 2 пробирки с бульоном Сабуро (по 10 мл среды вкаждой пробирке). При контроле стерильности чашек Петри небольшого диаметра (40 мм именее) весь физиологический раствор из одной чашки засевают в одну про-бирку (флакон) с 10 мл тиогликолевой среды. Во вторую пробирку (флакон)с бульоном Сабуро делают посев из второй чашки. Таким образом при конт-роле чашек Петри небольшого диаметра для посевов отбирают количествоизделий равное двум. 9.34. Посев на стерильность простого и хромированного кетгута вконсервирующем растворе. Нити кетгута извлекают стерильным пинцетом из ампулы или пакета иу пламени горелки (делать осторожно - консервант легко воспламеняется!)разрезают стерильными ножницами над пробиркой с питательной средой наотрезки длиной 1-2 см и засевают равными частями в 2 пробирки с 10 млтиогликолевой среды, 2 пробирки с бульоном Сабуро, как указано выше вп.9.33. 9.35. Посев на стерильность хирургических резиновых перчаток. Контроль стерильности хирургических перчаток осуществляется с по-мощью стерильного пинцета и стерильных ножниц. После вскрытия упаковкиу пламени горелки от резиновых перчаток отрезаются кусочки размером 1-2см и засеваются в 2 пробирки (колбы, флаконы) с тиогликолевой средой ив 2 пробирки (колбы, флаконы) с бульоном Сабуро. 10. Правила отбора проб и проведение контроля стерильности изделий медицинского назначения в лечебно-профилактических учреждениях 10.1. Объектами микробиологического контроля в лечебно-профилакти-ческих учреждениях являются: - хирургические инструменты, зонды, катетеры, бужи, хирургическийшовный материал, подготавливаемый к использованию в лечебно-профилакти-ческих учреждениях (кетгут, шелк, лавсан), различная аппаратура (аппа-раты экстракорпорального кровообращения и др.), перевязочные материалы,операционное белье. 10.2. В лечебно-профилактических учреждениях, имеющих централизо-ванные стерилизационные отделения, контролю на стерильность подлежит неменее 1% от числа одновременно простерилизованных изделий одного вида. 10.3. Забор проб на стерильность осуществляет специально подготов-ленный лаборант или операционная сестра. 10.4. При централизации процессов стерилизации все изделия, подле-жащие контролю, направляют в бак. лабораторию в упаковке, в которойосуществляли их стерилизацию (пакеты, стерилизационные коробки-биксы,мягкая упаковка). Перед доставкой в лабораторию стерильные изделия вупаковке дополнительно помешают в стерильную наволочку. После проведе-ния контроля стерильности все изделия, за исключением перевязочных ма-териалов подлежат обязательному возврату лечебно-профилактическому уч-реждению для последующего использования. 10.5. Для контроля стерильности используют среды, указанные вп.13. Культивирование посевов осуществляют в соответствии с п.9. Контроль стерильности изделий проводят путем погружения в пита-тельные среды. В исключительных случаях, когда необходимо проверитьстерильность инструмента больших размеров, пробы забирают методом смывастерильной салфеткой размером 5x5 кв.см, предварительно увлажненнойстерильным физиологическим раствором или стерильной водопроводной во-дой. 10.6. Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник,предварительно снимая наволочку. В предбокснике пакеты, биксы протираютснаружи с помощью стерильного пинцета (корнцанга) стерильной салфеткой(ватным тампоном), обильно смоченной 6% раствором перекиси водорода или70 град. этилового спирта, перекладывают на стерильный лоток и оставля-ют на 30 минут. При поступлении изделий в мягкой упаковке первый слойснимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносятв бокс. 10.7. Посев на стерильность хирургических инструментов. Хирургические инструменты с помощью стерильного пинцета извлекаютиз бикса или мягкой упаковки и целиком погружают в пробирки с питатель-ными средами. В отдельных случаях, если все простерилизованные инстру-менты в одной упаковке крупных размеров (иглодержатели, ранорасширителии т.д.) производят смывы с поверхности 2 инструментов одного наименова-ния стерильными салфетками, смоченными в стерильном физиологическомрастворе или стерильной водопроводной воде, и погружают салфетку в про-бирки с тиогликолевой средой и бульоном Сабуро. 10.8. Методика посева на стерильность катетеров, резиновых перча-ток и других изделий из резины и пластикатов. Контроль стерильности зондов, катетеров, резиновых перчаток и дру-гих изделий из резины производят путем полного погружения мелких изде-лий в питательные среды (п.9.1) от более крупных с помощью стерильногопинцета стерильными ножницами отрезают небольшие кусочки (1-2 см) ипогружают в питательные среды. 10.9. Посев на стерильность хирургического шовного материала. Перед посевом емкости с отобранными образцами шовного материала впредбокснике протирают стерильной марлевой салфеткой, обильно смоченной6% раствором перекиси водорода, и оставляют на 30 минут, затем вносят вбокс. Подготовленный к работе кетгут в операционном блоке хранят в спир-товом растворе йода. Перед посевом его подвергают специальной обработкедля нейтрализации и отмывания нейтрализующего раствора. Моток кетгута,приготовленный для исследования, перекладывают стерильным корнцангомили пинцетом в стерильный 10% раствор гипосульфата натрия. Раствор ги-посульфата натрия готовят на дистиллированной воде, разливают в пробир-ки (колбы) по 20-30 мл, стерилизуют при 120 град. Цельсия 30 минут.Кетгут выдерживают в растворе гипосульфита в течение 24 часов при ком-натной температуре (возможно помутнение раствора за счет выпадения се-ры), затем перекладывают в пробирки с 20-30 мл стерильной дистиллиро-ванной воды, где также выдерживают в течение 24 часов при комнатнойтемпературе. Непосредственно перед посевом моток кетгута извлекают сте-рильным пинцетом и перекладывают в стерильную чашку Петри, с помощьюпинцета и ножниц его разрезают на мелкие кусочки длиной 1-2 см и раз-дергивают для прорастания микроорганизмов внутри кетгута. Посев производят в 2 пробирки с тиогликолевой средой и 2 пробиркис бульоном Сабуро, помещая в каждую пробирку по 4-5 кусочков исследуе-мого материала. Приготовленный к работе шелк (лавсан) в операционных хранят вспиртовом растворе, поэтому перед посевом его помещает на 24 часа встерильную дистиллированную воду при комнатной температуре. Перед посе-вом моток шелка (лавсана) перекладывают в стерильные чашки Петри, раз-резают на мелкие кусочки длиной 1-2 см. Посев производят также, как икетгута. 10.10. Исследование на стерильность аппаратов экстракорпоральногокровообращения. Исследование на стерильность аппаратов искусственного кровообраще-ния проводят в операционной после асептической сборки аппарата. Контролю подлежит: смыв из аппарата, перфузат до перфузии, кровьпосле перфузии. Стерильный физиологический раствор в количестве не менее 250 млпрогоняют через аппарат, подготовленный к операции, отбирают 100 млраствора и засевают на питательные среды по 20 мл в 100 мл питательнойсреды (п.9.1). Аналогично производят посев перфузата до перфузии и кро-ви после перфузии. 10.11. Посев на стерильность перевязочного материала. Бинты, ватные шарики, марлевые салфетки, турунды и т.п. отбираютиз разных мест бикса стерильным пинцетом. Мелкие изделия целиком погру-жают в пробирки с питательными средами. От бинтов (внутренних частей) икрупных марлевых салфеток с помощью стерильных ножниц отрезают кусочкии погружают в пробирки с питательными средами (п.9.1). На каждый видперевязочного материала используют по 2 пробирки каждой среды. 10.12. Посев на стерильность хирургического белья. Простерилизованными и фламбированными ножницами (смоченными вспирте и проведенными через пламя горелки) с помощью пинцета от хирур-гического белья отрезают небольшие кусочки ткани (завязка, внутренниешвы и т.п.) и погружают в пробирки с питательными средами (п.9.1), некасаясь стенок пробирки (колбы). Наряду с прямым методом посева изделий медицинского назначения впитательные среды существует метод мембранной фильтрации. 11. Метод мембранной фильтрации 11.1. Испытание продукции на стерильность проводят с использовани-ем фильтрационной установки, включающей фильтродержатель, соединенный сколбой-приемником. Фильтродержатель состоит из воронки с крышкой и ос-нования из пористой пластины, на которую помещают мембрану. Используютмембраны с размером пор 0,45 +/- 0,02 мкм, диаметром около 47 мм. Испы-тания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см.рт.ст.) при скорости выте-кания воды 55-75 мл в мин. Допускается использования аппарата, предс-тавляющего собой стерильную замкнутую систему и работающего также попринципу фильтрации растворов. 11.2. Фильтровальную установку в собранном виде стерилизуют насы-щенном паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02 МПа (2,2 +/- 0,2КГС/см) и температуре 121 град. Цельсия +/- 1 град. Цельсия в течение20 мин. Стерилизацию можно осуществлять любым другом способом, обеспе-чивающим сохранность рабочих характеристик мембраны, а также стериль-ность мембраны и всей рабочей установки (ионизирующее излучение, окисьэтилена и т.п.). 11.З. Фильтрование отобранных образцов проводят в асептических ус-ловиях. Испытуемый раствор пропускают с помощью вакуума через одну илинесколько мембран. После фильтрования мембраны извлекают, разрезают стерильными нож-ницами на две равные части, каждую из которых помещают в отдельную кол-бу с 100 мл тиогликолевой среды. Питательные среды с помещенными в нихфильтрами выдерживают при температуре 35 град. Цельсия +/- 2 град.Цельсия и при температуре 22 град. Цельсия +/- 2 град. Цельсия в тече-ние 7 суток при ежедневном просмотре. 11.4. При испытании продукции, разлитой в емкости большого объема,через фильтры пропускают содержимое 5-10 емкостей, если объем каждойемкости составляет от 100 до 500 мл. При наличии в емкости более 500 млраствора на стерильность испытывают по 500 мл содержимого каждой из5-10 емкостей на 2-3 мембранах. При испытании препаратов, представляющих собой вязкую жидкость илимедленно фильтрующиеся суспензии, необходимо предварительно добавитьрастворитель, указанный в частной статье, для увеличения скорости филь-трации. Для контроля стерильности условий, в которых проводят испытания,необходимо фильтровать растворитель без испытуемого препарата с после-дующим воспроизведением всех вышеописанных операций. 12. Учет и оценка результатов испытания на стерильность 12.1. Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окон-чании периода инкубации. 14 суток инкубируют при прямом методе посева и7 суток при методе мембранной фильтрации. Наличие роста микроорганизмовв питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки,осадка и других макроскопических изменений. Выявленный рост микроорга-низмов необходимо подтвердить микроскопированием мазков, окрашенных поГраму. 12.2. Испытуемый образец считают удовлетворяющим требованиям испы-тания на стерильность при отсутствии роста микроорганизмов. При обнару-жении роста хотя бы в одной пробирке (колбе, флаконе) его подтверждаютмикроскопированием и повторяют испытание на удвоенном количестве образ-цов. При отсутствии роста микроорганизмов при повторном посеве испытуе-мый образец считают удовлетворяющим требованию испытания на стериль-ность. 12.3. В случае роста микроорганизмов при повторном посеве (помут-нение питательной среды, образование пленки, осадка) хотя бы в однойпробирке или флаконе, морфологически сходных с микроорганизмами выяв-ленными в первичном посеве, испытуемый образец считают нестерильным.При наличии роста морфологически несходной микрофлоры, исследуемый ма-териал подлежит повторному исследованию. 13. Питательные среды 13.1. Тиогликолевая среда. Состав: гидролизат казеина 15 г (в пересчете на сухой остаток) дрожжевой экстракт 5 г (10% в пересчете на сухой остаток) натрий хлористый 2,5 г глюкоза 5 г цистин 0,75 г тиогликолевая кислота 0,3 мл раствор резазурина 1:1000 1 мл (свежеприготовленный) агар-агар дальневосточный 0,75 г вода дистиллированная до 1000 мл pH среды после стерилизации 7,0-7,2 13.2. Приготовление. Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кис-лоты. Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве дистилли-рованной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора едкого натрадо его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором едкогонатра до pH 8,0-8,2 кипятят в котле с паровой рубашкой или на открытомогне при постоянном перемешивании до расплавления агар-агара 5-10 минутили автоклавируют 20 минут при 100 град. Цельсия. Прибавляют горячуюводу до первоначального объема, вносят глюкозу и тиогликолевую кислоту,фильтруют через полотно, устанавливают pH 7,2-7,3. Добавляют растворрезазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Сте-рилизуют 20 минут при 120 град. Цельсия. Тиогликолевую среду можно хранить до посева, предохраняя ее отсвета, при комнатной температуре в течении не более 7 суток со дня при-готовления. Примечания: - допускается приготовление среды без раствора резазурина; - допускается применение других сортов агар-агара, но с заранееоттитрованным количеством. 13.3. Бульон Сабуро. Состав: сухой пептон ферментативный 10 г глюкоза или мальтоза 100 г вода дистиллированная до 1000 мл pH среды после стерилизации 5,5-5,8 13.4. Приготовление. В воду добавляют пептон и кипятят 10 минут. Фильтруют. К получен-ному объему после фильтрации прибавляют глюкозу и мальтозу. Если pH вы-ше, чем 5,7 то следует подкислить 5% раствором соляной кислоты до pH5,7. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 110град. Цельсия 30 минут. Срок хранения среды 14 суток со дня приготовле-ния. 13.4. Контроль стерильности питательных сред. Для контроля стерильности питательные среды после изготовления истерилизации помещают в термостат при температуре 30-35 град. Цельсияна 72 часа. Бульон Сабуро контролируют полностью (всю приготовленнуюсерию пробирок, колб, флаконов). Тиогликолевую среду выдерживать при повышенной температуре до ис-пользования не допускается, поэтому от каждой серии отбирают 1% от об-щего числа пробирок, колб, флаконов и выдерживают их в термостате притемпературе 30-35 град. Цельсия в течении 72 часов. Для контроля сте-рильности эту часть среды не используют. 14. Подготовка посуды 14.1. Новую посуду до мытья кипятят в слабом растворе 1-2% солянойкислоты во избежание дальнейшего выщелачивания стекла. Мытье производят ершами с мылом и содой, затем тщательно промываютпроточной и ополаскивают дистиллированной водой, что предупреждает вы-падение солевых остатков при высушивании. Подготовленную и высушенную посуду завертывают в бумагу и стерили-зуют.