ПРЕКРАТИЛ ДЕЙСТВИЕ                в соответствии со статьей 36 Закона КР                    от 20 июля 2009 года № 241          "О нормативных правовых актах Кыргызской Республики"Зарегистрировано в Министерстве юстиции Кыргызской Республики19 марта 2004 года. Регистрационный номер 37-04                                                     Утверждены                                              постановлением Главного                                           Государственного санитарного                                            врача Кыргызской Республики                                           от 20 февраля 2004 года № 10           МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ                    2.3.2. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ                Определение безопасности и эффективности                 биологически активных добавок к пище                          Методические указания                                                        МУК 2.3.2.005-03                              1. Область применения      Настоящие методические указания разработаны Департаментом госсанэ-пиднадзора Министерства здравоохранения Кыргызской Республики  в  соот-ветствии  с Законом Кыргызской Республики "О санитарно-эпидемиологичес-ком благополучии населения",  Положением  "О  государственном  санитар-но-эпидемиологическом нормировании",  Положением "О государственной са-нитарно-эпидемиологической службе Кыргызской Республики", утвержденнымипостановлением  Правительства Кыргызской Республики от 10.12.2001 г.  №778, с учетом МУК 2.3.2.721-98, разработанного ведущими научно-исследо-вательскими институтами Российской Федерации.     1.1. Методические указания предназначены для органов государствен-ной исполнительной власти и органов местного самоуправления,  предприя-тий,  организаций, учреждений и иных юридических лиц (далее - организа-ции), физических лиц без образования юридического лица, должностных лици граждан, деятельность которых осуществляется в области обращения БАД,для  организаций санитарно-эпидемиологической службы Кыргызской Респуб-лики (далее - госсанэпидслужбы Кыргызской  Республики),  осуществляющихгосударственный и ведомственный санитарно-эпидемиологический надзор,  атакже для других организаций, уполномоченных на осуществление государс-твенного контроля за безопасностью и эффективностью БАД.     1.2. Требования,  изложенные в настоящих методических указаниях  вотношении  биологически активных добавок к пище,  применяются на этапахэкспертизы и регистрации биологически активных добавок к пище,  а такжепри разработке и постановке их на производство, промышленном производс-тве,  хранении, транспортировании, закупке, ввозе в страну и реализации(далее  - при обращении БАД),  при разработке нормативной и техническойдокументации, регламентирующей вопросы обращения БАД.     1.3. За качество, безопасность, заявленные свойства, эффективностьи рекламу выпускаемой биологически активной добавки к пище  полную  от-ветственность несет производитель.     1.4. Гигиенические требования к веществам, материалам, в том числевспомогательным  и упаковочным,  контактирующим с биологически активнойдобавкой к пище,  устанавливаются специальными санитарными правилами  инормами.                        2. Термины и определения      Пищевые продукты - продукты, используемые человеком в пищу в нату-ральном или переработанном виде.     Биологически активные  добавки к пище - композиции натуральных илиидентичных натуральным биологически активных  веществ,  предназначенныхдля  непосредственного  приема  с  пищей или введенных в состав пищевыхпродуктов с целью обогащения рациона отдельными пищевыми  или  биологи-чески активными веществами и их комплексами.     Нутрицевтики - биологически активные добавки к  пище,  применяемыедля  коррекции химического состава пищи человека (дополнительные источ-ники нутриентов: белка, аминокислот, жиров, углеводов, витаминов, мине-ральных веществ, пищевых волокон).     Парафармацевтики - биологически активные добавки к пище, применяе-мые для профилактики, вспомогательной терапии, и поддержки в физиологи-ческих границах функциональной активности органов и систем.     Качество биологически  активных  добавок к пище - совокупность ха-рактеристик,  которые обусловливают потребительские свойства, эффектив-ность и безопасность биологически активных добавок к пище.     Безопасность биологически активных добавок,  к пище  -  отсутствиеопасности для жизни и здоровья людей нынешнего и будущих поколений.     Эубиотики - биологически активные добавки к пище, в состав которыхвходят живые микроорганизмы и (или) их метаболиты, оказывающие нормали-зующее воздействие на состав и биологическую активность микрофлоры  пи-щеварительного тракта. Пробиотики - синоним эубиотики.                           3. Общие положения      3.1. Методические  указания  "Определение безопасности и эффектив-ности биологически активных добавок к пище" (далее по тексту  использу-ются  сокращенные  термины - методические указания и БАД) устанавливаютгигиенические требования по определению  безопасности  и  эффективностидля человека биологически активных добавок к пище и сырья для их произ-водства, а также требования по соблюдению указанных нормативов при раз-работке нормативной и технической документации на них и обращения БАД.     3.2. Методические указания разработаны с целью обеспечения  едино-го,  научно-обоснованного подхода к оценке эффективности и безопасностибиологически активных добавок к пище на этапах разработки,  экспертизы,регистрации и обращения БАД.     3.3. Требования настоящих методических указаний должны выполнятьсяпри  разработке  государственных стандартов,  нормативной и техническойдокументации, регламентирующей вопросы обращения БАД.     Проекты нормативной  и технической документации должны быть согла-сованы с организациями госсанэпидслужбы Кыргызской Республики  в  соот-ветствии с утвержденным порядком.     3.4. Санитарно-эпидемиологическая экспертиза биологически активныхдобавок  к  пище  проводится специально уполномоченными организациями впорядке,  утвержденном Министерством здравоохранения Кыргызской Респуб-лики,  на основании нормативных и методических документов Государствен-ной системы санитарно-эпидемиологического нормирования Кыргызской  Рес-публики.     3.5. При разработке новых видов биологически  активных  добавок  кпище и их усовершенствовании, а также при разработке (изменении) техно-логических процессов юридическими лицами,  осуществляющими  разработку,обеспечивается  обоснование  их соответствия заявленным медико-биологи-ческим эффектам,  срокам годности,  показателям качества и безопасностипродукции,  требованиям  по их соблюдению на этапах обращения,  а такжеметодам контроля.     3.6. Разработчик  новой  биологически  активной  добавки  к пище и(или) ее производитель обязаны включить в нормативную и техническую до-кументацию показатели ее качества и безопасности,  гигиенические норма-тивы,  требования по обеспечению указанных нормативов в процессе произ-водства,  хранения,  транспортирования и реализации продукции,  а такжетребования к ее упаковке и маркировке, сроки годности и методы контролякачества и безопасности продукции.     3.6.1. Производство биологически активных добавок  к  пище  должноосуществляться в соответствии с нормативной и технической документациейи отвечать требованиям санитарных правил и норм в  области  обеспечениякачества и безопасности.     3.6.2. Качество и безопасность каждой партии (серии)  биологическиактивных добавок к пище подтверждается производителем в удостоверении окачестве.     3.7. Постановка  на производство новых биологически активных доба-вок к пище,  производство БАД допускается только после  проведения  ре-гистрации  данной биологически активной добавки к пище в соответствии спроцедурой,  устанавливаемой Министерством  здравоохранения  КыргызскойРеспублики.     3.8. Постановка на производство биологически активных добавок  пи-ще, не являющихся новыми, но впервые осваиваемых на предприятии, допус-кается только при наличии:     - регистрационного удостоверения на данные БАД;     - санитарно-эпидемиологического заключения,  выданного  территори-альными центрами госсанэпиднадзора Кыргызской Республики о соответствииусловий производства санитарным правилам,  и  нормам,  требованиям,  пообеспечению  качества  и безопасности БАД,  установленным в техническойдокументации,  а также регламентируемыми в "Регистрационном удостовере-нии".     3.9. Импортируемые на территорию Кыргызской Республики биологичес-ки  активные  добавки  к пище должны отвечать требованиям действующих вКыргызской Республики санитарных правил и гигиенических нормативов, ес-ли иное не оговорено международными соглашениями.     3.10. Безопасность и эффективность импортируемых БАД к пище  опре-деляется  на основании санитарно-эпидемиологической экспертизы конкрет-ного вида импортируемой продукции и оценке ее соответствия  действующимсанитарным  правилам и гигиеническим нормативам Кыргызской Республики сучетом соответствия БАД требованиям безопасности, установленным для та-кой продукции в стране ее происхождения.     3.10.1. Показатели качества и безопасности, гигиенические нормати-вы,  которым  соответствует  предполагаемый  к  ввозу вид БАД и которымдолжна соответствовать импортируемая в страну продукция, устанавливают-ся в Регистрационном удостоверении.     3.10.2. Организации, осуществляющие производство и поставку импор-тируемых  на территорию Кыргызской Республики биологически активных до-бавок к пище, обязаны зарегистрировать их в порядке, установленном Пра-вительством Кыргызской Республики.     3.11. Организации, осуществляющие деятельность в области обращениябиологически активных добавок к пище,  несут ответственность за обеспе-чение качества и безопасности БАД.  Они обязаны проводить  мероприятия,направленные на выполнение требований санитарных правил и гигиеническихнормативов,  технической документации по обеспечению условий производс-тва, транспортирования, хранения и реализации БАД.     3.12. Расфасовка и упаковка биологически активных добавок  к  пищедолжны  обеспечивать сохранение их качества и безопасности на всех эта-пах обращения продукции.     3.13. Производитель биологически активных добавок к пище, предназ-наченных для реализации на территории Кыргызской Республики, должен вы-пускать их маркированными в соответствии с законодательством КыргызскойРеспублики и нормативной документацией, регламентирующей вопросы марки-ровки продукций.     3.13.1. Расфасованные и упакованные биологически активные  добавкик пище должны иметь этикетки, на которых на русском языке указывается:     - наименование продукта и его вид;     - номер технических условий (для отечественных БАД);     - область применения;     - название  организации-изготовителя  и  ее юридический адрес (дляимпортируемых на территорию Кыргызской Республики  продуктов  -  странапроисхождения и наименование фирмы изготовителя);     - вес и объем продукта;     - наименование  входящих в состав продуктов ингредиентов,  включаяпищевые добавки;     - пищевая ценность (калорийность, белки, жиры, углеводы, витамины,микроэлементы);     - условия хранения;     - срок годности и дата изготовления;     - способ применения (в случае,  если требуется дополнительная под-готовка БАД);     - рекомендации по применению, дозировка;     - противопоказания к использованию и побочные действия (при  необ-ходимости);     - особые условия реализации (при необходимости).     3.13.2. Рекомендации по применению биологически активных добавок кпище должны быть составлены на основе экспериментального изучения БАД иклинических испытаний и содержать сведения о дозировке БАД, курсе прие-ма препарата, противопоказаниях и побочных эффектах.     3.14. Организация, осуществляющая реализацию биологически активныхдобавок к пище,  обязана обеспечить условия реализации в соответствии ссогласованными при регистрации регламентами, а также санитарными прави-лами и нормами в области обеспечения ее безопасности.     3.14.1. Не  допускается реализация биологически активных добавок кпище:     - не  соответствующих санитарным правилам и нормам в области обес-печения качества и безопасности;     - без удостоверения о качестве;     - с истекшим сроком годности;     - при отсутствии надлежащих условий реализации;     - без информации о проведении обязательной регистрации БАД;     - без этикетки,  а также в случае, когда информация на этикетке несоответствует информации, согласованной при регистрации;     - идентифицировать которые не представляется возможным.     3.15. Не допускается использование при  производстве  БАД  к  пищерастительного сырья и продукции животноводства, полученных с применени-ем генной инженерии (трансгенных продуктов),  без разрешения  уполномо-ченных  на  то органов государственной исполнительной власти в порядке,установленном Правительством Кыргызской Республики.     3.16. Фирма-изготовитель должна гарантировать,  что животноводчес-кое сырье,  использованное для производства биологически активных доба-вок к пище, получено из хозяйств, не регистрировавших при новых заболе-ваний,  и свободно от других возбудителей, потенциально опасных для че-ловека.  В  целях снижения риска передачи агентов прионовых заболеваний(Bovine Spongiform Encephalopathy - BSE)  через  биологически  активныедобавки к пище рекомендуется везде,  где это возможно,  запретить в ка-честве источника биологического сырья материалы риска.  Решением Комис-сии  ЕС  "EU  Commission  Decision  of  Juli  30th,  1997  (97/534  ЖС)75/320/EEC on prohibition of the use of material  presenting  risks  asregard  of transmissible spongioforme encephalopaties" определены мате-риалы риска:     а) череп,  включая  мозг и глаза,  небные миндалины и спинной мозгбыков (коров) старше 12 месяцев, коз (козлов), овец (баранов) старше 12месяцев или имеющих коренные резцы, прорезывающиеся сквозь десны;     б) селезенка овец (баранов) и коз (козлов).     При ввозе  биологически активных добавок к пище,  изготовленных изсырья животного происхождения, должна приниматься во внимание эпидемио-логическая ситуация по BSE в стране фирмы-изготовителя.     3.17. Производство,  ввоз в страну,  хранение, транспортирование иреализация населению биологически активных добавок к пище, не соответс-твующих нормативам качества и безопасности,  утвержденным в установлен-ном порядке, не допускается.     3.18. Для проведения лабораторных исследований (измерений) качест-ва и безопасности пищевой продукции допускаются метрологически аттесто-ванные  методики,  соответствующие  требованиям   ГОСТов   8.010-90   и8.556-91,  установленные  значения  показателей  погрешности которых непревышают норм погрешности по ГОСТу 27384-87, а также методики, утверж-денные или допущенные к применению госсанэпидслужбой Кыргызской Респуб-лики.     Для определения эффективности биологически активных добавок к пищеиспользуются методы, указанные в данных методических указаниях.     3.19. Качество,  безопасность биологически активных добавок к пищеи способность их оказывать декларируемый изготовителем эффект определя-ются  соответствием  их гигиеническим нормативам,  установленным СанПиН2.3.2.560-96 "Гигиенические требования к качеству и безопасности продо-вольственного  сырья  и  пищевых  продуктов" и настоящими методическимиуказаниями.     3.20. Органолептические  свойства  биологически активных добавок кпище определяются показателями вкуса, цвета, запаха и консистенции, ус-тановленными производителем и характерными для каждого вида продукции.     3.21. Требования, которым должны соответствовать органолептическиесвойства биологически активных добавок к пище, устанавливаются в норма-тивной и технической документации на их производство.     3.22. Гигиенические нормативы включают химические соединения и би-ологические объекты,  присутствие которых в пищевой продукции не должнопревышать  допустимых  уровней  их содержания в заданной массе (объеме)исследуемой продукции.     3.23. В биологически активных добавках к пище регламентируется со-держание основных действующих веществ.     3.24. При  получении неудовлетворительных результатов анализа хотябы по одному из показателей проводят повторный анализ удвоенного объемавыборки, взятого из той же партии.                 4. Порядок санитарно-эпидемиологической                экспертизы, государственной регистрации                и перерегистрации биологически активных                            добавок к пище      4.1. Проведение санитарно-эпидемиологической экспертизы и  регист-рации  биологически  активных добавок к пище осуществляется в соответс-твии с порядком, установленным Министерством здравоохранения КыргызскойРеспублики.     4.2. Санитарно-эпидемиологическая экспертиза и регистрация  биоло-гически активных добавок к пище включает следующие процедуры:     - первичную экспертную оценку документов и материалов,  характери-зующих данную продукцию;     - определение потребности в проведении необходимых исследований;     - проведение комплекса необходимых санитарно-химических,  санитар-но-микробиологических и других видов исследований;     - экспериментальные исследования токсикологических,  физиологичес-ких и метаболических эффектов, подтверждающие заявленный профиль БАД;     - клиническую оценку эффективности;     - комплексную экспертную оценку результатов с учетом полученных  входе исследований данных;     - оформление регистрационного удостоверения на биологически актив-ную добавку к пище, присвоение номера, включение в реестр.     4.3. Для проведения работ по санитарно-эпидемиологической  экспер-тизе  и  регистрации биологически активных добавок к пище ее производи-тель,  поставщик или полномочный представитель  представляют  следующиедокументы:     - заявку установленной формы с указанием полных реквизитов  произ-водителя и поставщика БАД;     - акт отбора проб установленной формы, в котором указывается дата,место отбора образцов, их количество, наименование продукции, юридичес-кий адрес предприятия-изготовителя,  дата  производства  БАД,  фамилии,должности и подписи лиц, отбиравших образцы;     - при наличии посредника - доверенность от производителя на прове-дение  работ по регистрации биологически активной добавки к пище с ука-занием получателя регистрационного удостоверения и его владельца;     - образцы биологически активных добавок к пище в количестве, опре-деленном действующим порядком экспертизы.  В случае проведения токсико-логических  или  клинических  испытаний количество необходимых образцовопределяется дополнительно.     4.3.1. Для  биологически  активных добавок к пище,  производимых вКыргызской Республике, представляются:     - нормативная  или  техническая документация (технические условия,технологическая инструкция,  рецептура),  оформленная в соответствии  сустановленной формой;     - пояснительная записка, описывающая биологически активную добавкук пище, область ее применения, рекомендации по применению, противопока-зания, ограничения по применению БАД при их наличии;     - потребительская этикетка или ее проект,  заверенный производите-лем;     - инструкция  по  применению  с  указанием доз,  сроков и способовупотребления БАД, заверенную производителем;     - материалы (оригинальные и литературные для аналогов) по токсико-лого-гигиенической и биологической оценке БАД и ее клинической оценке;     - санитарно-гигиеническая  характеристика  производства,  выданнаяцентром госсанэпиднадзора по месту производства БАД.     4.3.2. Для  импортируемых  биологически  активных  добавок  к пищепредставляются:     - сертификаты качества и безопасности фирмы-изготовителя, содержа-щие данные о показателях безопасности,  ингредиентный состав и его  ха-рактеристику, сроки годности, условия хранения;     - для БАД,  содержащих части растения, указывается их ботаническоеназвание на латинском языке и форма (экстракт, настой и т.п.);     - документы официально уполномоченного  органа  страны-экспортера,подтверждающие безопасность данной продукции и ее эффективность,  доку-мент о регистрации;     - краткие сведения о технологии производства, стандарт предприятияна выпуск БАД;     - пояснительная записка, описывающая биологически активную добавкук пище, область ее применения, рекомендации по применению, противопока-зания, ограничения по применению БАД при их наличии;     - потребительская этикетка или ее проект,  заверенная производите-лем;     - инструкция по применению с  указанием  доз,  сроков  и  способовупотребления БАД, заверенная производителем продукции;     - материалы (оригинальные и литературные для аналогов) по токсико-лого-гигиенической  и  биологической оценке БАД и ее клинической эффек-тивности,  протоколы или заверенные копии результатов клинических испы-таний,  в которых указаны учреждения,  проводившие эти испытания, схемапроведения испытаний и результаты в сравнении с контрольной группой;     - гигиенический сертификат,  в котором указывается, что производс-тво данной продукции  осуществляется  в  соответствии  с  национальнымии/или международными требованиями для БАД к пище (требования GMP - Goodmanifacture practice, стандартам Международной организации стандартиза-ции - ISO 9000, 9001, 9002; или Сертификата национальных и/или междуна-родной ("EuroNett") организаций о соответствии производства  БАД  стан-дартам ISO 9000-9002. Декларация фирмы изготовителя о соответствии про-изводства указанным выше требованиям ISO может быть представлена в видеспециальных знаков на бланках фирмы.     Все материалы представляются в оригинале и (или) нотариально заве-ренные копии, и в переводе на русский язык.     4.4. Проведение исследований, осуществляется в учреждениях и лабо-раториях, аккредитованных в установленном порядке.     4.5. По результатам проведенной работы готовится  санитарно-эпиде-миологическое заключение.     4.6. В случае отсутствия или непредставления необходимых  докумен-тов, наличия в составе БАД неразрешенных компонентов или лекарственногосырья,  не разрешенного в Кыргызской Республике, содержания сильнодейс-твующих компонентов,  являющихся лекарственными средствами в терапевти-ческих дозах, может быть принято решение об отказе в регистрации.     4.7. При экспертизе биологически активных добавок к пище, предназ-наченных для детей, необходимо учитывать следующие факторы:     - БАД для детей первых трех лет жизни не должен содержать аромати-заторы, консерванты и стабилизаторы;     - БАД для детей могут включать только биологически активные соеди-нения, которые разрешены для использования детьми соответствующего воз-раста.     4.8. Перерегистрация биологически активных добавок к пище осущест-вляется в соответствии с порядком,  установленным Министерством здраво-охранения Кыргызской Республики.     4.8.1. Основанием  для перерегистрации биологически активных доба-вок к пище является:     - окончание  срока действия ранее выданного регистрационного удос-товерения;     - изменение формы выпуска БАД;     - изменение области применения  и  рекомендаций  по  использованиюБАД;     - изменение наименования, смена торговой марки фирмы-изготовителя;     - изменение гигиенических требований к БАД;     - изменение противопоказаний и ограничений по применению БАД;     - внесение  изменений  в нормативную и техническую документацию наБАД.     4.8.2. Для  перерегистрации  БАД  ее производитель,  поставщик илиполномочный представитель представляет:     - заявку на перерегистрацию биологически активной добавки к пище спояснительной запиской о причинах перерегистрации БАД до окончания сро-ка действия "Регистрационного удостоверения";     - документы в соответствии с перечнем, установленным для регистра-ции БАД;     - промышленные образцы БАД;     - копию ранее выданного "Регистрационного удостоверения".     4.8.3. Для внесения изменений в область применения и  рекомендациипо  использованию БАД необходимо представление данных клинико-эпидемио-логических исследований,  выполненных по программам, утвержденным в ус-тановленном порядке.     4.9. По итогам экспертизы уполномоченным учреждением  Министерстваздравоохранения Кыргызской Республики готовится регистрационное удосто-верение или мотивированный отказ в адрес заявителя.     4.10. В случае обращения по поводу перерегистрации БАД, связанногос изменением или увеличением числа фирм-поставщиков, уполномоченным уч-реждением Министерства здравоохранения Кыргызской Республики,  в поряд-ке,  установленном Минздравом Кыргызской Республики, выдается документ,подтверждающий  право  поставки  и  реализации данной БАД на территорииКыргызской Республики. Вышеуказанный документ выдается только при нали-чии доверенности от фирмы-изготовителя, подтверждающей права фирмы-пос-тавщика на право распространения данной БАД.     4.11. При выдаче "Регистрационного удостоверения" на отечественныйБАД,  уполномоченное учреждение Министерства здравоохранения КыргызскойРеспублики направляет информацию в территориальный центр госсанэпиднад-зора по месту его производства (разработки) для осуществления  госсанэ-пиднадзора за соблюдением установленных требований при обращении БАД.             5. Санитарно-эпидемиологическая характеристика           производства биологически активных добавок к пище      5.1. Санитарно-эпидемиологическая оценка производства биологическиактивных  добавок  к  пище осуществляется с целью проверки соответствияусловий производства БАД действующим санитарным правилам и  гигиеничес-ким  нормативам,  организации производственно-технологического контроляза качеством и безопасностью сырья и готовой продукции.     5.2. Санитарно-эпидемиологическая  оценка  производства БАД к пищеосуществляется  Департаментом  госсанэпиднадзора  Минздрава  КыргызскойРеспублики и территориальными центрами госсанэпиднадзора (далее - ГСЭН)по месту производства БАД.     5.3. При  проведении  санитарно-эпидемиологической  оценки  произ-водств, расположенных на территории Кыргызской Республики, учитываются:     - наличие на предприятии необходимых условий для производства дан-ного вида и объема БАД;     - возможное  неблагоприятное влияние работы предприятия на условияпроживания населения или на окружающую среду (рассматриваются: заключе-ние по отводу земельного участка, санитарно-эпидемиологическое заключе-ние по проекту строительства или реконструкции,  вопросы очистки терри-тории);     - состояние условий труда работающих  на  предприятии,  соблюдениеправил личной гигиены персоналом, наличие медицинской документации пер-сонала;     - организация производственного контроля на предприятии за качест-вом исходного сырья,  технологией производства и показателями  безопас-ности конечной продукции;     - соответствие набора производственных помещений технологии произ-водства данного вида БАД.     5.4. При  проведении  санитарно-эпидемиологической  оценки  произ-водств, расположенных за пределами Кыргызской Республики, учитываются:     - наличие на предприятии необходимых условий для производства дан-ного вида БАД;     - осуществление производственного контроля за качеством  исходногосырья,  технологией  производства  и показателями безопасности конечнойпродукции;     - соответствие выпускаемой продукции требованиям санитарных правили норм, действующих на территории Кыргызской Республики.     5.5. По результатам санитарно-эпидемиологической оценки производс-тва представляется заключение о соответствии условий производства БАД кпище требованиям санитарного законодательства Кыргызской Республики.                    6. Порядок осуществления контроля                  за производством и реализацией БАД      6.1. За соответствием качества и безопасности биологически  актив-ных  добавок к пище гигиеническим нормативам должен осуществляться про-изводственный контроль,  государственный и ведомственный санитарно-эпи-демиологический надзор.     6.2. Производственный контроль за соблюдением гигиенических норма-тивов качества и безопасности биологически активных добавок к пище осу-ществляют организации,  действующие в сфере производства данной продук-ции. Порядок проведения производственного контроля определяется органи-зацией в соответствии с требованиями нормативной и технической докумен-тации по рабочим программам и технической документации, согласованным сцентрами госсанэпиднадзора Кыргызской Республики.     6.3. Государственный  санитарно-эпидемиологический  надзор  за ка-чеством и безопасностью биологически активных добавок к  пище  осущест-вляют органы госсанэпидслужбы Кыргызской Республики,  ведомственный са-нитарно-эпидемиологический надзор - организации санитарно-эпидемиологи-ческих служб республиканских органов исполнительной власти,  на которыесанитарным законодательством Кыргызской Республики возложены эти  функ-ции.     6.4. Организация производства биологически активных добавок к пищеосуществляется  при  наличии  санитарно-эпидемиологического  заключениятерриториального ЦГСЭН о соответствии условий  действующим  требованиямсанитарного  законодательства и согласованным при регистрации регламен-там,  а также утвержденным и согласованным с органами  госсанэпидслужбыКыргызской Республики рабочим программам производственного контроля.     6.5. Центры госсанэпиднадзора Кыргызской  Республики  осуществляютконтроль за условиями производства и реализации БАД, соответствием эти-кетки нa готовой продукции установленным требованиям и информации,  за-ложенной  в  регистрационном  удостоверении,  проводят выборочный отборпроб и лабораторные исследования соответствия БАД установленным  требо-ваниям качества и безопасности, осуществляют контроль за условиями про-изводства, поставки, хранения и реализации БАД.     6.5.1. По заявке производителя БАД, а также в соответствии с пору-чениями Департамента госсанэпиднадзора Минздрава Кыргызской  Республикии  территориального центра Госсанэпиднадзора Министерства здравоохране-ния Кыргызской Республики осуществляют оценку состояния производства  ипроизводственно-технологического контроля качества и безопасности сырьяи готовой продукции на функционирующих производствах,  предполагаемых коткрытию,  применительно  к  производству  БАД  с составлением санитар-но-эпидемиологического заключения.     6.5.2. Осуществляют госсанэпиднадзор на производстве, при хранениина оптовых и розничных предприятиях, в торговле за соблюдением:     - условий производства,  технологического и лабораторного контролякачества и безопасности сырья;     - условий хранения;     - порядка реализации информации,  выносимой на этикетку (соответс-твие ее данным "Регистрационного удостоверения"),  соответствия рекламыБАД информации, согласованной при регистрации (по данным "Регистрацион-ного удостоверения").     6.5.3. Проводят выборочный отбор проб и лабораторные  исследованиясоответствия БАД установленным требованиям качества и безопасности.     6.5.4. При выявлении нарушений принимают меры в соответствии с За-коном  Кыргызской Республики "О санитарно-эпидемиологическом благополу-чии населения".     6.5.5. Направляют  информацию  в Департамент госсанэпиднадзора Ми-нистерства здравоохранения Кыргызской Республики о выявленных нарушени-ях, принятых мерах и результатах проведенной работы.     6.6. Биологически активные добавки к пище, качество которых не со-ответствует  гигиеническим  нормативам,  изымаются из обращения их вла-дельцем,  а также по постановлению организаций, осуществляющих госсанэ-пиднадзор, и не подлежат реализации по целевому назначению. Изъятые БАДмогут быть использованы в иных  целях,  утилизированы  или  уничтожены.Удостоверение отзывается в установленном порядке.     6.7. Обоснование возможных способов и условий использования,  ути-лизации или уничтожения биологически активных добавок к пище проводитсяих владельцем по согласованию с органами, вынесшими постановление об ихизъятии.     6.8. Использование,  утилизация или уничтожение изъятой  продукцииосуществляется их владельцем или организацией (физическим лицом), кото-рой владелец передает по договору выполнение этих работ.     6.9. Изъятая продукция до ее использования, утилизации или уничто-жения подлежит хранению в отдельном помещении (резервуаре),  на  особомучете, с точным указанием ее количества, способов и условий использова-ния,  утилизации или уничтожения.  Ответственность за сохранность такойпродукции несет владелец.     6.10. Биологически активные добавки к пище,  подлежащие  уничтоже-нию, должны быть подвергнуты денатурации, способы, сроки и условия про-ведения которой определяются в каждом конкретном случае  их  владельцемпо согласованию с организациями госсанэпиднадзора.     6.11. Владелец БАД представляет в органы,  вынесшие  постановлениеоб изъятии, акт об ее использовании, утилизации или уничтожении.     6.12. Организации, осуществляющие государственный санитарно-эпиде-миологический  надзор,  вынесшие  постановление об изъятии из обращениябиологически активных добавок,  осуществляют контроль за ее использова-нием, утилизацией или уничтожением.                  7. Оценка БАД по санитарно-химическим                       показателям безопасности -----------------------------------------------------------------------|   Показатель  |    Метод определения   |     Предел    |Литературный||               |                        |  обнаружения  |  источник  ||---------------|------------------------|---------------|------------||Цинк, медь,    |Атомно-абсорбционный    |1 мкг/кг       |     (1)    ||свинец, кадмий,|                        |               |            ||олово, железо  |                        |               |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Ртуть          |Колориметрический       |10 мкг/кг      |     (2)    ||---------------|------------------------|---------------|------------||Мышьяк         |Колориметрический       |100 мкг/кг     |     (3)    ||---------------|------------------------|---------------|------------||Пестициды      |Газо-жидкостная         |1 мкг/кг       |     (4)    ||               |хроматография           |               |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Углеводороды   |Оптические и            |100 мкг/кг     |     (5)    ||               |хроматографические      |               |            ||               |методы (ГЖХ, ВЭЖХ, ХМС) |               |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Патулин        |Хроматографический (ТСХ)|10 мкг/кг      |    (76)    ||---------------|------------------------|---------------|------------||Афлатоксин M1  |Хроматографические      |               |     (6)    ||               |ТСХ,                    |0,3 мкг/кг     |            ||               |ВЭЖХ                    |0,02 мкг/кг    |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Афлатоксин B1  |Хроматографические      |               |     (6)    ||               |ТСХ,                    |1 мкг/кг       |            ||               |ВЭЖХ                    |0,15 мкг/кг    |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Зеараленон     |Хроматографические      |               |     (8)    ||               |ТСХ,                    |100 мкг/кг     |            ||               |ВЭЖХ                    |5 мкг/кг       |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Дезоксинива-   |Хроматографические      |               |     (8)    ||ленол          |ТСХ,                    |200 мкг/кг     |            ||               |ВЭЖХ                    |50 мкг/кг      |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Т-2 токсин     |Хроматографический ТЖХ  |50 мкг/кг      |     (9)    ||---------------|------------------------|---------------|------------||Нитриты        |Титрометрический        |10 мг/кг       |    (78)    ||---------------|------------------------|---------------|------------||Нитрозамины    |Флюориметрический,      |1 мкг/кг       |    (77)    ||               |хемилюминисцентный      |0,1 мкг/кг     |            ||---------------|------------------------|---------------|------------||Остаточные     |Микробиологический      |0,01-0,5 ЕД/г  |    (10)    ||количества     |                        |               |            ||антибиотиков   |                        |               |            |-----------------------------------------------------------------------     Все санитарно-химические  показатели  БАД  должны  соответствоватьнормам, указанным в "Гигиенических требованиях к качеству и безопаснос-ти продовольственного сырья и пищевых  продуктов"  СанПиН  2.3.2.560-96(127).                8. Санитарно-микробиологический контроль                 безопасности и качества биологически                        активных добавок к пище      8.1. Биологически активные добавки к пище из растительного сырья,          из сырья животного происхождения, поликомпонентные добавки с          включением витаминов, микроэлементов, минерального сырья и          т.д. -----------------------------------------------------------------------|                     Показатель                      |    Документ   ||-----------------------------------------------------|---------------||Количество мезофильных аэробных и факультативно      |      (11)     ||анаэробных микроорганизмов                           |               ||-----------------------------------------------------|---------------||Бактерии группы кишечных палочек (колиформы)         |      (12)     ||-----------------------------------------------------|---------------||E.coli                                               |      (13)     ||-----------------------------------------------------|---------------||S. aureus (коагулазоположительные стафилококки)      |      (14)     ||-----------------------------------------------------|---------------||B.cereus                                             |      (15)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы        |      (16)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Дрожжи                                               |      (17)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Плесневые грибы                                      |      (17)     |-----------------------------------------------------------------------      8.2. Биологически активные добавки к пище с эубиотическим          действием на основе чистых культур микроорганизмов -----------------------------------------------------------------------|                     Показатель                      |    Документ   ||-----------------------------------------------------|---------------||Количество жизнеспособных клеток в культуре          |      (18)     ||микроорганизма эубиотика                             |               ||-----------------------------------------------------|---------------||Количество бифидобактерий в 1 г препарата типа       |      (19)     ||бифидобактерина                                      |               ||-----------------------------------------------------|---------------||Количество молочнокислых бактерий в 1 г препарата    |      (20)     ||типа лактобактерина                                  |               ||-----------------------------------------------------|---------------||Бактерии группы кишечных палочек (колиформы)         |      (21)     ||-----------------------------------------------------|---------------||S. aureus (коагулазоположительные стафилококки)      |      (22)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы        |      (16)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Дрожжи                                               |      (17)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Плесневые грибы                                      |      (17)     |-----------------------------------------------------------------------     Название микроорганизма эубиотика в нормативной документации  и  вэтикетной надписи должно быть указано на латинском языке с обозначениемрода и вида микроорганизма.      8.3. Биологически активные добавки к пище смешанного состава          (культуры эубиотиков, добавки различных нутриентов) -----------------------------------------------------------------------|                     Показатель                      |    Документ   ||-----------------------------------------------------|---------------||Контроль за количеством жизнеспособных               |      (21)     ||микроорганизмов эубиотиков                           |               ||-----------------------------------------------------|---------------||Бактерии группы кишечных палочек (колиформы)         |      (21)     ||-----------------------------------------------------|---------------||E.coIi                                               |      (13)     ||-----------------------------------------------------|---------------||S. aureus (коагулазоположительные стафилококки)      |      (22)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы        |      (16)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Дрожжи                                               |      (17)     ||-----------------------------------------------------|---------------||Плесневые грибы                                      |      (17)     |-----------------------------------------------------------------------     Конкретные микробиологические нормативы для различных групп биоло-гически активных добавок к пище приведены в "Гигиенических  требованияхк качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов"СанПиН 2.3.2.560-96 (127).               9. Радиологические показатели безопасности      Согласно "Гигиеническим требованиям к качеству и безопасности про-довольственного сырья и пищевых продуктов" СанПиН 2.3.2.560-96 для био-логически активных добавок к пище, в состав которых входит растительноесырье, определяются радиологические показатели безопасности.-----------------------------------------------------------------------|          Показатель          |Допустимый уровень|   Литературный    ||                              |    (не более)    |      источник     ||------------------------------|------------------|-------------------||Цезий-137                     |200 Бк/кг         |        (156)      ||------------------------------|------------------|-------------------||Стронций-90                   |100 Бк/кг         |        (157)      |-----------------------------------------------------------------------     Радиационная безопасность БАД к пище,  загрязненной другими радио-нуклидами,  определяется соответствием ее  нормативам  ГН  2.6.1.054-96"Нормы радиационной безопасности (НРБ-96)".                            10. Нутрицевтики      Биологически активные добавки к пище подразделяются на нутрицевти-ки и парафармацевтики (134).  Нутрицевтики - биологически активные  до-бавки к пище,  применяемые для коррекции химического состава пищи чело-века,  смысл применения которых заключается в том, чтобы довести содер-жание  естественных эссенциальных макро- и микронутриентов до уровня ихсодержания в суточном рационе,  соответствующем физиологической потреб-ности  здорового человека в них.  В этой связи нутрицевтики - источникивитаминов, полиненасыщенных жирных кислот, макро- и микроэлементов, пи-щевых волокон, других пищевых веществ в большем числе случаев не нужда-ются в оценке их профилактической эффективности в  эксперименте  или  вклинических наблюдениях,  поскольку при экспертной оценке рецептур этихпродуктов,  заключение о возможной их эффективности эксперт может стро-ить на основе общеизвестных литературных данных и учете рекомендованныхдоз компонентов нутрицевтика в  сравнении  с  физиологической  суточнойпотребностью в них здорового человека. Нутрицевтики подвергаются полнойсхеме исследований на определение в них декларируемых  величин  пищевыхвеществ и показателей безопасности.     Функциональная роль нутрицевтиков направлена на:     - восполнение дефицита эссенциальных пищевых веществ;     - направленные изменения метаболизма веществ;     - повышение  неспецифической  резистентности  организма к действиюнеблагоприятных факторов окружающей среды;     - иммуномодулирующее действие;     - связывание и выведение ксенобиотиков;     - лечебное питание.     Конечной целью использования нутрицевтиков является улучшение  пи-щевого статуса человека,  укрепление здоровья и профилактика ряда забо-леваний.     При проведении  оценки безопасности и эффективности необходимо оп-ределить долю (в процентах) от суточной потребности,  которая обеспечи-вается нутриентами, входящими в состав предлагаемой биологически актив-ной добавки к пище при рекомендуемой дозе приема.     Этикетка маркируется лишь теми величинами, значения которых превы-шают 5%  (витамины и макро- и микроэлементы) или 2% (другие пищевые ве-щества  и  энергия).  Содержание витаминов не должно превышать суточнуюпотребность более чем в три раза для витаминов А,  Д,  B1, В2, В6, В12,ниацина, фолиевой кислоты, пантотеновой кислоты, биотина и не более чемв 10 раз - для витаминов Е и С(*).                 Средневзвешенные нормы физиологических              потребностей в пищевых веществах и энергии -----------------------------------------------------------------------|Энергия                               |2500 ккал                     ||--------------------------------------|------------------------------||Белок                                 |12% по калорийности или 75 г  ||--------------------------------------|------------------------------||Жир                                   |30% по калорийности или 83 г  ||--------------------------------------|------------------------------||Углеводы                              |58% по калорийности или 363 г ||--------------------------------------|------------------------------||Пищевые волокна                       |20,0 г                        ||--------------------------------------|------------------------------||Витамины:                             |                              ||--------------------------------------|------------------------------||C (аскорбиновая кислота)              |60-70 мг                      ||--------------------------------------|------------------------------||тиамин (B1)                           |1,5 мг                        ||--------------------------------------|------------------------------||рибофлавин (B2)                       |2,0 мг                        ||--------------------------------------|------------------------------||пиридоксин (B6)                       |2,0 мг                        ||--------------------------------------|------------------------------||цианокобаламин (B12)                  |0,003 мг (3 мкг)              ||--------------------------------------|------------------------------||биотип                                |0,15 мг (150 мкг)             ||--------------------------------------|------------------------------||пантотеновая кислота                  |5-7 мг                        ||--------------------------------------|------------------------------||фолиевая кислота                      |0,2 мг (200 мкг)              ||--------------------------------------|------------------------------||ниацин PP                             |20 мг                         ||--------------------------------------|------------------------------||витамин A                             |1 мг (3300 ME)                ||--------------------------------------|------------------------------||витамин E                             |10 мг                         ||--------------------------------------|------------------------------||витамин Д                             |дети 400 ME (10 мкг), взрослые||                                      |100 ME (2,5 кг)               ||--------------------------------------|------------------------------||Микро- и макроэлементы:               |                              ||кальций                               |800 мг/сутки                  ||--------------------------------------|------------------------------||магний                                |400 мг/сутки                  ||--------------------------------------|------------------------------||фосфор                                |1200 мг/сутки                 ||--------------------------------------|------------------------------||железо                                |мужчины - 10 мг, женщины - 20 ||                                      |мг в сутки                    ||--------------------------------------|------------------------------||медь                                  |2 мг                          ||--------------------------------------|------------------------------||цинк                                  |15 мг                         ||--------------------------------------|------------------------------||йод                                   |0,2 мг                        ||--------------------------------------|------------------------------||эссенциальные жирные кислоты с        |4% по калорийности или        ||расшифровкой семейства                |11 г в сутки                  |-----------------------------------------------------------------------      10.1. Типовая схема экспериментальной модели на лабораторных           животных оценки эффективности нутрицевтиков      В случае,  если эффективность нутрицевтика не доказана, проводятсяэкспериментальные исследования,  на лабораторных животных.  Типовая мо-дель таких исследований представлена в таблице.-----------------------------------------------------------------------|        Вид животных        |Количество|Количество|Продолжи-|Название||                            |   групп  | животных |тельность|  групп ||                            | животных | в группе |  опыта  |        ||----------------------------|----------|----------|---------|--------||Крысы, мыши, морские свинки,|    4     |  8-10    |1-2      |контроль||кролики и др.               |          |          |месяца   |опыт-1  ||                            |          |          |         |опыт-2  ||                            |          |          |         |опыт-3  |-----------------------------------------------------------------------     Описание групп животных:     контроль - животные находятся на полноценном общевиварном или син-тетическом рационе;     опыт-1 - модель дефицита изучаемого нутриента;     опыт-2 -  модель  дефицита изучаемого нутриента на фоне введения врацион изучаемого нутрицевтика;     опыт-3 -  животным вместе с кормом вводится испытываемый нутрицев-тик в агравированной дозе.     Забой животных  проводится через 1-2 месяца от начала введения ис-пытуемого нутрицевтика. Проводится оценка интегральных показателей сос-тояния животных (внешний вид,  активность, масса тела, абсолютная и от-носительная масса внутренних органов). Специальные биохимические, гема-тологические,  иммунологические и морфологические методы исследования взависимости от состава испытуемого нутрицевтика изложены в приложениях.                          11. Парафармацевтики      Парафармацевтики - биологически активные добавки к пище, применяе-мые для профилактики,  вспомогательной терапии и поддержки в физиологи-ческих границах функциональной активности органов и систем.     Суточная доза парафармацевтика или,  в случае композиции, суточнаядоза действующего начала парафармацевтика,  не должна превышать разовуютерапевтическую  дозу,  определенную  при применении этих веществ в ка-честве лекарственных средств,  при условии приема БАД не менее двух разв сутки.     Все растения, входящие в состав парафармацевтика, должны быть про-верены по отечественной и международной нормативной документации в пла-не разрешения их применения в пищевой промышленности, а также в составелекарственных  чаев  и сборов в соответствии с требованиями Фармацевти-ческого комитета Кыргызской  Республики  и  требованиями  международныхстандартов.      12.1. Показатели подлинности некоторых лекарственных растений,           входящих в состав парафармацевтиков, и методы их определения              Растения, оказывающие влияние на центральную                            нервную систему -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Женьшень (корень)          |панаксозвды       |ТСХ, КЦР |    (62)    ||---------------------------|------------------|---------|------------||Аралия маньчжурская        |аралозиды А, В, С |ТСХ, ПМТ |    (62)    ||(корень)                   |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Лимонник китайский (семена)|эфирные масла     |ГЖХ, ХМС |  (62, 67)  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Золотой корень (родиола    |салидрозид        |ТСХ, СФ  |    (62)    ||розовая) (корневище,       |(антрагликсзид)   |         |            ||корень)                    |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Чай китайский (листья)     |алкалоиды (кофеин,|ГЖХ      |    (71)    ||                           |ксантин)          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Валериана лекарственная    |эфирное масло     |ГЖХ, ХМС |  (65, 67)  ||(корневище, корень)        |борниизовалерианат|         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Синюха голубая (корневище, |тритерпеновые     |КЦР      |    (62)    ||корни)                     |сапонины          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Душица обыкновенная (трава)|эфирные масла     |В, ГЖХ   |  (61, 62)  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Пустырник пятилопастный    |флавоноиды,       |КЦР      |    (62)    ||(трава)                    |алкалоиды         |         |            ||                           |(стадидрин)       |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Амми зубная (плоды)        |флавоноиды        |ХСФ      |    (63)    ||                           |(келлин)          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Пастернак посевной (плоды) |фурокумарины      |П, ФЛ    |    (63)    ||---------------------------|------------------|---------|------------||Вздутоплодник мохнатый     |дигидросамидин    |ГЖХ      |    (63)    ||(корневище, корни)         |(пиранокумарины)  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Мята перечная (листья)     |эфирное масло     |В, ГЖХ,  |   (61-67)  ||                           |(ментол, ментон,  |ХМС      |            ||                           |пинен, лимонен)   |         |            |-----------------------------------------------------------------------                 Растения, применяемые при атеросклерозе -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Боярышник кровавокрасный   |флавоноиды        |ХСФ      |    (62)    ||(цветки, плоды)            |(гиперозид)       |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Роза коричная (шиповник)   |витамин C         |Т        |    (62)    ||(плоды)                    |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Ламинария сахаристая       |йод               |Т        |    (62)    ||(слоевище)                 |                  |         |            |-----------------------------------------------------------------------                Растения, содержащие вещества, обладающие           общеукрепляющим и противовоспалительным действием -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Ромашка аптечная (цветки)  |эфирное масло     |В, ГЖХ   |    (62)    ||---------------------------|------------------|---------|------------||Череда трехраздельная      |флавоноиды        |ТСХ, К   |    (62)    ||(трава)                    |полисахариды      |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Толокнянка обыкновенная    |фенольные         |Т        |    (62)    ||(листья)                   |гликозиды         |         |            ||                           |(арбутин)         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Календула лекарственная    |каротин, ликопин  |ХСФ      |    (72)    ||(цветки)                   |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Сосна лесная (почки)       |эфирное масло     |В, ГЖХ,  |(61, 65-67) ||                           |                  |ХМС      |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Девясил высокий (корневище |инулин            |КЦР      |    (62)    ||и корни)                   |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Алтей лекарственный (корни)|полисахариды      |КЦР      |    (62)    ||                           |(слизи)           |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Шалфей лекарственный       |эфирное масло     |ГЖХ, ХМС |   (65-67)  ||(листья)                   |(цинеол, туйон,   |         |            ||                           |сальвен)          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Зверобой продырявленный    |флавоноиды        |СФ       |    (62)    ||(трава)                    |(рутин)           |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Сушеница топяная (трава)   |флавоноиды        |В        |    (62)    ||                           |(гиафалозид А)    |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Подорожник большой (листья)|полисахариды      |В, КЦР   |    (62)    ||                           |(галактоуроновая  |         |            ||                           |кислота)          |         |            |-----------------------------------------------------------------------                        Растения, оказывающие влияние на                        пищеварительную систему -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Бессмертник песчаный       |флавоноиды        |СФ, ХСФ  |  (69, 63)  ||(цветки)                   |(изосалилпурпозид)|         |            |-----------------------------------------------------------------------                       Растения, содержащие горечи -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Одуванчик лекарственный    |инулин            |КЦР      |    (62)    ||(корни)                    |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Золотысячник зонтичный     |горькие гликозиды |ХСФ      |    (62)    ||(трава)                    |(аллизарин)       |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Вахта трелистная (листья)  |горькие гликозиды |КЦР, СФ  |    (62)    ||                           |флавоноиды        |         |            ||                           |(рутин)           |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Аир (корневище)            |эфирное масло     |В, ГЖХ,  |(61, 65-67) ||                           |(каломен, камфен) |ХМС      |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Тмин обыкновенный (плоды)  |эфирное масло     |В, ГЖХ,  |(61, 65-67) ||                           |(карвон,          |ХМС      |            ||                           |карвакрон,        |         |            ||                           |лимонен)          |         |            |-----------------------------------------------------------------------                   Растения, обладающие слабительными,                  закрепляющими и вяжущими свойствами -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Лист сенны                 |производные       |СФ       |   (62-63)  ||                           |антрацена         |         |            ||                           |(истизин)         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Крушина опьховидная (кора) |производные       |СФ, ХСФ  |    (62)    ||                           |антрацена         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Ревень тунгутский (корни)  |производные       |СФ       |   (62-63)  ||                           |антрацена         |         |            ||                           |(истизин)         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Стальник полевой (корни)   |изофлавоноиды     |ТСХ, СФ  |    (62)    ||                           |(ононин)          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Ольха серая (соплодия)     |дубильные вещества|КЦР      |    (62)    ||---------------------------|------------------|---------|------------||Черемуха обыкновенная      |дубильные вещества|КЦР      |    (62)    ||(плоды)                    |амигдаллин        |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Дуб чешуйчатый (кора)      |дубильные вещества|КЦР      |    (62)    ||---------------------------|------------------|---------|------------||Бадан толстолистый         |дубильные вещества|КЦР      |    (62)    ||(корневище)                |                  |         |            |-----------------------------------------------------------------------             Растения, обладающие диуретическими свойствами -----------------------------------------------------------------------|   Наименование растения   |    Показатель    |  Метод  |Литературный||                           |                  |         |  источник  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Брусника (листья)          |арбутин, дубильные|КЦР      |    (62)    ||                           |вещества          |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Можжевельник (плоды)       |эфирное масло     |В, ГЖХ   |   (62-63)  ||---------------------------|------------------|---------|------------||Марена красильная          |производные       |СФ       |    (62)    ||(корневище, корни)         |антрацена         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Василек синий посевной     |антоцианы         |СФ       |    (62)    ||(цветки)                   |                  |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Хвощ полевой (трава)       |флавоновые        |ТСХ      |   (62-63)  ||                           |гликозиды         |         |            ||---------------------------|------------------|---------|------------||Горец птичий спорыш (трава)|флавоноиды        |СФ, ТСХ  |  (62, 63)  ||                           |(авикулярин)      |         |            |-----------------------------------------------------------------------     Сокращения: Б - биологический,  БХ - бумажная хроматография,  В  -весовой,  ГЖХ - газожидкостная хроматография,  ВЭЖХ - высокоэффективнаяжидкостная хроматография,  СФ - спектрофотометрия,  ФЛ -  флуориметрия,ХСФ  - спектрофотометрический анализ с предварительным хроматографичес-ким разделением образца, ТСХ - тонкослойная хроматография, П - полярог-рафия,  ПТ - потенциометрическое титрование, Т - титрование, ХМС - хро-мато-масс-спектрометрия, КЦР - качественная цветная реакция.      12.2. Экспериментальное изучение функциональной активности           парафармацевтиков      Физиологический уровень  содержания действующих начал многих пара-фармацевтиков в клетках и тканях организма не известен (например,  био-генные амины, олигопептиды, гликозиды, органические кислоты, сапонины идр.),  равно как и не известна физиологическая потребность в них взрос-лого здорового человека.  Более того,  у достаточно большого количестватаких БАД вообще не идентифицированы активные компоненты, т.е. действу-ющие начала. Примером таких соединений могут служить экстракты, получа-емые из сложных комплексов пищевых и лекарственных  растений  и  другихвидов  природного сырья.  Отсутствие нормы количественного содержания ворганизме, действующих веществ парафармацевтиков, а также физиологичес-кой потребности в них,  в ряде случаев вызывает необходимость оценки ихдействия на организм в целом или отдельные его системы и  органы,  т.е.возникает задача исследования функциональной активности парафармацевти-ков.     Назначение парафармацевтиков,  состоящих из лекарственных растенийс высоким уровнем содержания высокоактивных действующих начал без четкоустановленных доз и четкого знания механизмов действия,  в ряде случаевможет привести к тому,  что реакции компенсаторно-адаптационного харак-тера могут оказаться неадекватными:  более сильными, чем нужно, или ос-лабленными.  Это может стать причиной развития последующих патологичес-ких изменений в организме.  Так, например, если при общем адаптационномсиндроме секреция глюкокортикоидов окажется чрезмерной, они будут угне-тать развитие иммунологических,  неспецифических защитных реакций (вос-паление),  и тогда резко повышается риск развития огромного числа забо-леваний,  связанных с недостаточной функциональной активностью иммуннойсистемы (135).     Целью данного  раздела  методических  указаний  является выявлениевлияния БАД-парафармацевтиков на показатели систем, участвующих в меха-низмах  развития компенсаторно-приспособительных реакций,  на основаниикоторых можно, было бы судить, в конечном счете, об эффективности неко-торых видов БАД-парафармацевтиков, которая в большинстве случаев заклю-чается в их профилактическом (в отношении развития патологических  про-цессов) или общеукрепляющем действии.      Основные отличия БАД-парафармацевтиков от лекарств      а. БАД-парафармацевтики в большинстве случаев являются источникамиприродных компонентов пищи, не обладающих питательной ценностью, однакоотносящихся  к  незаменимым факторам питания - органическим компонентампищевых и лекарственных растений, продуктов моря и компонентов животныхтканей.  Реже действующие начала БАД-парафармацевтиков могут быть полу-чены биотехнологическими или химическими способами. К БАД-парафармацев-тикам относятся и продукты,  приготовленные на основе композиций микро-организмов,  предназначенные для нормализации и поддержания микробиоце-ноза кишечника (эубиотики/пробиотики).  Действующие начала БАД-парафар-мацевтиков специфически поддерживают или регулируют  в  физиологическихпределах функции отдельных органов и систем.  Применяются исключительно"per os".  Реализуются в свободной продаже как через специальные отделыпродовольственных магазинов,  так и через отделы безрецептурных средстваптек. При использовании БАД-парафармацевтиков в качестве вспомогатель-ных средств при диетотерапии заболеваний человека или в качестве специ-фических профилактических средств перед их применением необходима  кон-сультация врача-специалиста.     б. Эффект БАД-парафармацевтиков реализуется путем  инициации  уни-версальных  механизмов адаптационно-приспособительных реакций организмана воздействие раздражителей самой различной природы.     в. Количественные  изменения  параметров функционирования систем иорганов организма лежат в пределах их физиологической нормы.     г. Широкий  (гораздо  более  чем у лекарств) диапазон используемыхдоз,  при которых БАД-парафармацевтики оказывают свое  нормализующее  икорректирующее действие на функции отдельных органов и систем организмачеловека при отсутствии токсичных и побочных эффектов.      Принципы экспериментального изучения БАД-парафармацевтиков      а. Учитывая комплексность и плейотропность физиологических  эффек-тов  БАД-парафармацевтиков при изучении их эффективности,  предпочтениеследует отдавать экспериментальным моделям "in vivo".     б. Исходя из абсолютной предопределенности алиментарного пути пос-тупления пищевых веществ,  все  изучаемые  БАД-парафармацевтики  должнывводиться при их экспериментальной оценке "per os".     в. Тестированию следует  подвергать  готовую  к  применению  формуБАД-парафармацевтика,  а не отдельные компоненты, входящие в ее состав,на уровне доз, рекомендованных для человека (используя общепринятые дляэтого  в токсикологии и фармакологии методики пересчета,  в т.ч.  на кгмассы тела).     г. При  оценке  действия БАД-парафармацевтиков необходимо исследо-вать их влияние на системы,  участвующие в формировании реакций  остройфазы или общих механизмов реализации адаптационного синдрома.      Основные методические подходы к экспериментальной оценке     эффективности БАД-парафармацевтиков      Большое разнообразие адаптационных неспецифических защитно-приспо-собительных  реакций  организма  на раздражители различного рода крайнезатрудняет оценку функциональной  активности  БАД-парафармацевтиков  насистемы сохранения динамического гомеостаза организма.  Однако, как из-вестно,  все системы, участвующие в реакциях острой фазы, тесно связаныдруг с другом посредством различного рода медиаторов,  пептидов, гормо-нов, трофических факторов, лимфокинов через соответствующий рецепторныйаппарат (136). Иными словами, любое изменение одной системы обязательноприводит к изменениями других системах.  В этой связи выбор исследуемыхсистем  диктуется набором преимущественных эффектов БАД-парафармацевти-ка.     Как известно, основным эффектом БАД-парафармацевтиков является по-вышение резистентности организма к инфекциям,  стрессорным, агрессивнымвоздействиям  химической и физической природы.  Такие эффекты БАД-пара-фармацевтиков в большинстве случаев обусловлены положительным  влияниемих  на  различные звенья иммунной и детоксикационной систем организма идругие общие механизмы адаптационно-приспособительных реакций,  в  т.ч.за счет поддержания функции антиоксидантных систем организма.     Вышеизложенное позволяет констатировать, что оптимальная схема оп-ределения  функциональной активности БАД-парафармацевтиков должна вклю-чать изучение их влияния на систему иммунитета, резистентность к стрес-сорным  воздействиям  разнообразной природы (физическая нагрузка,  дли-тельный стресс,  химические и т.д.) и на окислительно-антиокислительныйстатус организма.  Правильность именно такого подхода к эксперименталь-ной оценке эффективности БАД-парафармацевтиков вытекает из известных  имногократно доказанных учеными разных стран фактах о том, что поражениеименно этих систем лежит в основе наиболее распространенных заболеванийчеловека.  Взаиморегуляция нервной, иммунной и окислительно-антиокисли-тельной систем определяет надежность их совместной деятельности.  Нару-шение  же функциональной активности одной из этих систем резко повышаетриск развития функциональных расстройств общих механизмов защитно-прис-пособительных  реакций  на воздействие факторов окружающей и внутреннейсреды организма человека.  Так,  например,  нарушение нейрорегуляторныхмеханизмов  реализации адаптационного синдрома может играть важную рольв патогенезе иммунологических расстройств  и  дизрегуляции  радикальныхокислительных процессов,  а иммунологические механизмы, в свою очередь,могут участвовать в патогенезе заболеваний центральной нервной  системыи формировании окислительного стресса (136).     Учитывая это, для большей информативности и удешевления исследова-ний эффективности БАД-парафармацевтиков следует использовать унифициро-ванные экспериментальные модели. Примером может служить модель истощаю-щей физической нагрузки, которая кроме непосредственного изучения адап-тогенного действия БАД-парафармацевтика дает  возможность  исследованияего влияния на показатели иммунной (ФИО, ИЛ-2) и окислительно-антиокис-лительной (МД,  каталаза) систем. Использование данной модели позволяетустановить функциональную,  энантиостатическую безопасность(*) (Mangum,Towle,  1977) БАД-парафармацевтиков для здоровья  человека,  тем  самымпредопределяя обязательность такого рода исследований.     (*) Энантиостатическая безопасность - поддержание функции.     В случае, когда назначение БАД-парафармацевтика предполагает нали-чие какого-либо преимущественного эффекта или эффектов (радиопротектор-ного, иммуномодулирующего, антиоксидантного и т.д.) необходимо дополни-тельное изучение активности таких БАД в экспериментах, моделирующих со-ответствующие нарушения.     Так, для определения специфических эффектов  БАД-парафармацевтиковможно использовать следующие методические подходы:     - радиопротекторного действия БАД-парафармацевтиков - мышей  облу-чают сублетальными дозами рентгеновского излучения (200-300 Рад) и изу-чают влияние БАД на показатели иммунной системы,  с добавлением методовоценки пролиферативной и антителообразующей активности клеток селезенкии ОАО системы;     - иммуномодулирующего  действия БАД-парафармацевтиков - мышам вво-дят циклофосамид или циклоспорин А (применение того или  иного  иммуно-депрессанта  определяется  преимущественным действием БАД на конкретноезвено иммунной реакции) и изучают влияние БАД  на  показатели  иммуннойсистемы с добавлением методов определения пролиферативной и антителооб-разующей активности клеток селезенки мыши;     - ампиоксидантного  действия - мышам вводят раствор четыреххлорис-того углерода и изучают показатели ОАО системы,  с добавлением  методовопределения диеновой коньюгации ПНЖК и гидроперекиси липидов;     - резистентности к инфекциям - мышей заражают штаммом S.  typhi  иизучают  показатели  иммунной  системы с добавлением метода определениянеспецифической резистентности к инфекциям;     - изучение  адаптогенного  действия  парафармацевтиков проводят настандартных моделях различных экстремальных условий  (повышенная  физи-ческая нагрузка, гиподинамия), а также исследуют эмоциональные поведен-ческие реакции животных.      Лабораторные животные      Для изучения функциональной активности БАД-парафармацевтиков  раз-личной  природы используют мышей-самцов линии CBA/CaLacSto.  Количествоживотных в опытной группе следует определять с учетом используемой  мо-дели исследования,  кратности обследования животных и подсчета, статис-тически достоверных результатов (137).  В качестве контроля  используютгруппу здоровых интактных мышей той же линии.      Модель истощающей физической нагрузки      Влияние на общую физическую выносливость следует определять на мы-шах с помощью стандартной методики - плавания  животных  в  бассейне  стемпературой  воды (20 (+-) 0,5) град.  Цельсия.  Для уменьшения вариа-бельности получаемых результатов к каждой мыши подвешивают груз (5%  отмассы тела), не затрудняющий движения животного.     Исследуемую добавку вводят животным внутрижелудочно за 40 мин.  допомещения  их в бассейн.  Контрольным животным вводят тот же объем дис-тиллированной воды  или  физиологического  раствора.  Продолжительностьплавания регистрируют в секундах. Контрольную и опытную группы животныхделят на две подгруппы.  Первую подгруппу мышей забивают сразу же послепроведения  опыта,  выделяют селезенку (для изучения иммунной системы),печень и эритроциты (для изучения ОАО системы). Вторую подгруппу живот-ных забивают спустя 1 ч после опыта и также выделяют селезенку,  печеньи эритроциты для изучения темпов восстановления исследуемых показателей(138).      Изучение адаптогенного действия БАД-парафармацевтиков      Общие положения      В развитии адаптационных реакций, которые являются ответом на зна-чительную физическую,  стрессорную, гипоксическую или любую другую наг-рузку  выделяют два этапа:  этап срочной,  но несовершенной адаптации ипоследующий этап относительно устойчивой и достаточно совершенной  дол-говременной адаптации (139).  Срочный этап адаптационной реакции возни-кает непосредственно после начала действия раздражителя и, следователь-но,  может реализоваться лишь на основе готовых, ранее сформировавшихсябиологических механизмов. Важнейшая черта этого этапа адаптации состоитв  том,  что деятельность организма протекает на пределе его физиологи-ческих возможностей при полной мобилизации функционального резерва -  идалеко  не в полной мере обеспечивает необходимый адаптационный эффект.Другим неотъемлемым компонентом срочной адаптации при достаточно интен-сивном действии патологических факторов окружающей внутренней среды ор-ганизма человека является значительная стресс-реакция со всеми ее  про-явлениями,  т.е. увеличением концентрации катехоламинов, кортикостерои-дов,  медиаторов, эозинопенией и т.д. Наконец, существенным компонентомсрочной  адаптации может оказаться более или менее выраженное поврежде-ние организма, проявляющееся отрицательным азотистым балансом, увеличе-нием пероксидации липидов, ферментемией и т.д. (139).     Долговременный этап адаптации возникает  постепенно  в  результатедлительного  или многократного действия на организм факторов среды.  Посуществу он развивается на основе многократной реализации срочной адап-тации  и характеризуется тем,  что в итоге постепенного количественногонакопления каких-то изменений организм приобретает новое качество.     Таким образом, в зависимости от продолжительности действия патоло-гического фактора,  адаптация может быть кратковременной или  долговре-менной (140).     Специфичность адаптации проявляется в реакциях  доминирующих  сис-тем,  т.е.  функциональных систем организма,  изменение функции которыхобеспечивает гомеостаз под влиянием изменяющихся условий  существования(141).  Доминирующими,  системами  могут  быть  системы различных видовнервной деятельности,  транспорта жидких тканей,  газов и  метаболитов,мышечного сокращения, кислотно-щелочного состояния, терморегуляции, го-меостаза,  иммунитета и т.д. В функциональной системе, ответственной заадаптацию различают эффекторную и управляющую части (142).     Эффекторная часть  представлена  выполняющими   специализированнуюфункцию элементами (субсистемными, структурно-функциональными единицамиорганов, тканями, клетками, ультраструктурами, метаболическими путями).Управляющая  часть  состоит  из  центрального и периферического звеньевнейрогуморальной регуляции (Данное разграничение довольно условно,  таккак механизмы,  распределяющие каскады метаболических реакций между эф-фекторной и  управляющей  частями  недостаточно  изучены).  Эффекторнаячасть определяет специфическую функцию (например,  повышение физическойвыносливости и работоспособности за  счет  возбуждения  соответствующихмоторных центров,  мобилизации скелетных мышц, а также кровообращения идыхания). Управляющая часть обеспечивает адаптивное изменение специали-зированной  функции клетки путем ее мобилизации или перевода в неактив-ное состояние,  новообразования или редукции ее структурных или молеку-лярных  компонентов (например изменение эмоциональных поведенческих ре-акций,  а также иммунного  и  окислительно-антиокислительного  статуса)(143).     В связи с этим БАД к пище  следует  изучать  на  обе  составляющиеадаптивной реакции организма к действию различных раздражителей.      Методы оценки адаптогенного действия БАД-парафармацевтиков      а. Оценка  влияния  БАД-парафармацевтиков  на выносливость мышей кскоростной нагрузке.     Влияние на  выносливость  к скоростной физической нагрузке следуетопределять на 10-дорожном третбане при  скорости  движения  полотна  40м/мин.     Моментом окончания опыта считается пребывание животных на электри-ческой  сетке  третбана под напряжением 25 В более 10 с.  Опыт проводятпри двух функциональных состояниях животных: на фоне относительного по-коя  (свободного содержания животных в клетках) и на фоне предваритель-ной физической нагрузки. Нагрузку осуществляют с помощью принудительно-го бега животных в третбане при скорости движения ленты 28 м/мин. в те-чение 5 мин.  Животные, получившие предварительную физическую нагрузку,разделяются на 2 подгруппы. В первой подгруппе мыши подвергаются однок-ратной физической нагрузке в течение 5 мин. Вслед за этим животным вво-дят  изучаемую БАД и спустя 1 ч исследуют скоростную выносливость.  Жи-вотные второй группы ежедневно получают дозированную физическую нагруз-ку в течение 7 дней. В первый день длительность бега составляет 5 мин.,в другие дни продолжительность нагрузки последовательно увеличивают  на1 мин.  Сразу же за проведением нагрузки мышам вводят изучаемую БАД. На7-й день через 1 ч после последнего введения добавки у животных изучаютскоростную  выносливость.  Во  всех  экспериментах БАД-парафармацевтикивводят "per os", а животным контрольных групп - дистиллированную воду втом же объеме (138).     б. Оценка действия БАД-парафармацевтиков на переносимость животны-ми физических нагрузок.     Влияние на переносимость физических нагрузок следует изучать,  вы-зывая у животных состояние стресса в сочетании с гиподинамией, при под-вешивании мышей за шейную складку в течение 3-х дней по 18 ч ежедневно.В интервале между экспериментальными "подвешиваниями" животные получаютполноценное питание в условиях вивария.  Введение БАД-парафармацевтиковосуществляется алиментарным путем.  Контрольные мыши во время "подвеши-вания" подопытных животных лишаются воды и пищи.  Оценку  работоспособ-ности  проводят  по продолжительности бега животных в третбане при ско-рости движения полотна 28 м/мин. (138).     в. Оценка действия БАД-парафармацевтиков на эмоциональные поведен-ческие реакции животных.     Используют метод спровоцированных эмоциональных реакций.  Изучениесвойств БАД проводят методом электростимуляции попарно  сгруппированныхживотных в модификации Полевого Л.Г.  и Кудрина А.И.  Сущность методикизаключается в возможности дифференцированно  оценивать  пороги  эмоцио-нальных  поведенческих  реакций страха и ярости (агрессивности) у мышейпутем градуального повышения напряжения электрической площадки,  на ко-торую помещают 2-х животных. Изучаемую БАД вводят за 40 мин. до посадкиживотных на электрическую площадку.      Изучение иммуномодулирующего действия БАД-парафармацевтиков      Общие положения      Во всех случаях развития адаптивных реакций  происходит  активацияиммунной системы как конкретного звена управляющей части функциональнойсистемы,  ответственной за адаптацию. В основе иммуноадаптивных процес-сов лежат межклеточные взаимодействия, опосредованные гуморальными фак-торами. Полипептидные факторы неиммуноглобулиновой природы, относящиесяк  медиаторам неиммунологических реакций,  получили название цитокинов.Подобно регуляторным субстанциям другой природы и гормонам цитокины  похарактеру действия представляют собой факторы роста или дифференцирова-ния клеток и реализуют свое действие через обычные для подобных  факто-ров механизмы. Основными цитокинами, включающими группу приспособитель-ных реакций функциональной системы,  являются  медиаторы  естественногоиммунитета, которые, действуя на клетки-мишени разных органов, изменяютих функции. В результате выявляются следующие эффекты:     - в печени происходит усиление синтеза белков острой фазы (С - ре-активный белок,  гаптоглобин,  церулоплазмин и т.д.) и их  выделение  вкровь;     - в костном мозге стимулируется развитие нейтрофилов, что приводитк  нейтрофилии.  Усиливается  их  хемотаксис и активируется образованиеэтими клетками лактоферрина;     - активируются  центры  терморегуляции  в гипоталамусе (действие вкачестве эндогенных пирогенов);     - стимулируется катаболизм белков в мышцах. Образующиеся аминокис-лоты поступают в печень, где они используются для синтеза белков остройфазы и глюконеогенеза (135).     Типичным представителем группы медиаторов естественного  иммуните-та,  которые  непосредственно  участвуют в развитии иммунной реакции надействие раздражителя является фактор некроза опухоли - ( ) (ФНО-).     ФНО-  является медиатором широкого спектра  действия,  посредствомкоторого осуществляется регуляция, функциональной активности клеток им-мунной и воспалительной системы организма. Биологическое действие ФНО-,подобно влиянию ЛПС,  определяется его концентрационной зависимостью. Внизкой  концентрации порядка 10(-9) М,  действует на лейкоциты и клеткиэндотелия локально,  т.е.  по паракринному или аутокринному типу. В ре-зультате ФНО- вызывает на клетках эндотелия сосудов появление новых ре-цепторов адгезии лейкоцитов,  прежде всего нейтрофилов, а затем и моно-цитов и лимфоцитов. Усиление адгезии клеток на сосудистых стенках вызы-вает появление очагов локального воспаления.  В пределах данных  очаговлейкоциты усиливают бактериальный киллинг,  а действие ФНО- на мононук-леарные фагоциты и другие типы клеток активирует  продукцию  цитокинов,включая ИЛ-1,  ИЛ-6,  хемокинов и самого ФНО-. Таким образом, возникаеткаскад цитокиновых реакций, регулирующий активность локального иммунно-го  и  воспалительного процесса.  Кроме того,  ФНО- обладает интерферо-но-подобным действием,  усиливает экспрессию антигенов 1 класса  МНС  ицитолитическую активность Т-лимфоцитов (CD8(4)) в отношении вирус-инфи-цированных клеток (144, 145, 146).     Другая группа  медиаторов включает цитокины,  регулирующие актива-цию,  рост и дифференцирование лимфоцитов.  Среди них наиболее важным ихорошо изученным медиатором является интер-лейкин-2 (ИЛ-2).     ИЛ-2 является ключевым цитокином; активирующим митотическую актив-ность  и переход клетки из фазы G 1 в фазу S.  Основное количество ИЛ-2продуцируется Т-лимфоцитами CD-4+,  и гораздо меньший вклад для образо-вания  медиатора  имеют  Т-лимфоциты CD8+.  Основными клетками-мишенямиИЛ-2 являются сами клетки-продуценты, то есть данный медиатор выполняетроль аутокринного фактора активации и созревания Т-лимфоцитов.  Регуля-ция роста и созревания Т-лимфоцитов,  прежде всего хелперных CD-4+ лим-фоцитов,  включает механизм последовательного взаимодействия ИЛ-2 с ре-цепторами разной аффинности.  Созревание покоящихся Т-лимфоцитов, огра-ничено действием высокой концентрации ИЛ-2, а пролиферация активирован-ных лимфоцитов - диапазоном его низких концентраций.     Указанные взаимодействия  ИЛ-2 и Т-лимфоцитов осуществляются преи-мущественно по аутокринному типу.  Однако ИЛ-2 может оказывать действиеи на клетки ближайшего окружения,  выполняя функции паракринного росто-вого фактора CD-4+ и CD-8+,  Т-лимфоцитов. В период развития физиологи-ческой  иммунной реакции на антиген ИЛ-2 не поступает в кровяное русло.Поэтому при нормальном течении иммунного ответа его действие как эндок-ринного  ростового  фактора не проявляется.  Локальная продукция ИЛ-2 взоне созревания CDr4+ и CD-8+ клеток позволяет регулировать  количествои  соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов,  определяя тем самым величинуиммунного ответа на Т-зависимые антигены.  Кроме того, ИЛ-2 стимулируетВ-лимфоциты и усиливает продукцию специфических антител (5, 6, 14, 21).     Таким образом, в механизмах адаптационных изменений иммунного ста-туса организма ведущая роль принадлежит продукции таких, медиаторов им-муногенеза,  как ФНО- и ИЛ-2. В этой связи влияние БАД к пище на иммун-ную  систему следует оценивать по изменению уровня продукции иммуноком-петентными клетками вышеупомянутых цитокинов.      Методы оценки действия БАД к пище на показатели иммунной системы      При оценке специфической активности БАД  в  отношении  показателейиммунной  системы  необходимо исследовать ее действие не только на уро-вень секретируемых иммунокомпетентными клетками растворимых  медиаторовиммуногенеза, но и исследовать следствия изменения продукции цитокинов,т.е.  изучать клеточный и гуморальный ответ. Комплексное иммунологичес-кое  исследование  необходимо для решения вопроса о сохранении функцио-нальной полноценности иммунной системы после применения БАД.     Как известно,  одним  из  важнейших условий формирования иммунногоответа является пролиферация антиген-стимулированных иммунокомпетентныхклеток под действием медиаторов иммуногенеза, в частности ИЛ-2. Модельютакой  пролиферации  является  реакция  бласттрансформации   лимфоцитов(РБТЛ) под воздействием митогенов.  Митогены, конканавалин А (КонА) илифитогемагглютинин ФГА,  связываясь с рецептором клеточной  поверхности,приводят к продукции ИЛ-1 и ФНО, способствующих усилению экспрессии ре-цептора для ИЛ-2 - основного фактора пролиферации  Т-лимфоцитов.  Крометого,  ИЛ-2 стимулирует В-лимфоциты и усиливает продукцию специфическихантител.  Наиболее распространенный экспериментальный  подход  изучениягуморального иммунитета заключается в инициации процесса антигензависи-мой пролиферации и дифференцирования В-лимфоцитов, являющихся предшест-венниками антителообразующих клеток.     Для статистической обработки данных следует использовать  критерийt Стьюдента, представляя среднюю ошибку и ошибку средней (М+т) (147).      1. Оценка влияния БАД на показатели иммунной системы интактных        мышей      а. Определение влияния БАД на неспецифическую резистентность мышейк бактериальной инфекции.     Мышам вводят перорально и внутривенно БАД в трех дозах.  Контролемслужат мыши, не получавшие БАД. На каждую дозу берут по 10 мышей. Через24 ч всех мышей внутрибрюшинно заражают штаммом S.tiphi 4446, ресуспен-дированным  в  0,5%-ном муцине или используют любую другую инфекционнуюмодель. Заражающая доза равна 100 LDa, оттитрованная на интактных мышахпредварительно. Гибель животных учитывается в течение 5 сут. Параллель-но ставят контроль вирулентности используемого  штамма.  Через  5  сут.подсчитывают  ЕД-50  по  формуле  Кебера (Ашмарин И.Л.,  Воробьев А.А.,1962) или любым другим статистическим методом.     Статистически значимое уменьшение значения ЕД-50 в опытных группахсвидетельствует о стимулирующем действии БАД, увеличение - о супрессив-ном.     б. Определение уровня антител в сыворотке крови мышей к  корпуску-лярному тимусзависимому антигену.     Для определения антител в сыворотке крови мышей используют эритро-циты барана.  Иммунизируют мышей 2-х линий: С57В1 - низкореагирующие наэритроциты барана и мышей линии СВА - высокореагирующие. Опытную группумышей  (5 мышей) внутрибрюшинно иммунизируют 0,5 мл эритроцитами барана(концентрация 20 млн.кл/мл).  Эритроциты барана предварительно  3  разаотмывают  0,9%-ным  раствором  хлорида натрия путем центрифугирования 7мин.  при 400 g и доводят до концентрации  50  млн.кл/мл.  Одновременноэтой же группе животных вводят исследуемую добавку к пище в трех дозах.Контролем служат две группы мышей: одна группа - интактные мыши, другаяиммунизирована только эритроцитами барана. Через равные промежутки вре-мени, начиная с 4-го дня после введения препаратов, у каждой мыши беруткровь  из ретроорбитального пространства.  Срок исследования - не менее21 дня.  Из крови мышей получают сыворотку,  которую титруют в реакции,прямой гемагглютинации общепринятым методом.     Подсчитывают среднеарифметическую титра гемагглютиногенов в  сыво-ротке крови опытной группы мышей. Увеличение титров гемагглютиногенов всыворотке-крови опытной группы мышей  свидетельствует  о  стимулирующемдействии БАД.     в. Определение уровня антител в сыворотке крови мышей к  раствори-мому тимусзависимому антигену.     В качестве растворимого тимусзависимого антигена используют  бычийсывороточный альбумин (БСА).     Мышей иммунизируют БСА дозой 50 мкг в 0,5  мл  0,9%-ного  растворахлорида натрия внутрибрюшинно. Исследуемые продукты вводят в трех дозаходновременно с БСА или за 30 мин.  до иммунизации БСА. Контролем служатдве группы мышей: одна группа получает только БСА (без БАД), другая ин-тактная.     На 28  день после иммунизации проводится ревакцинация мышей той жедозой БСА и берется кровь у мышей на 7, 14 и 21 дни после ревакцинации.Получают  сыворотку  крови и исследуют ее в реакции РПГА на наличие ге-магглютининов к БСА общепринятым методом.     Для постановки РПГА готовят эритроцитарный диагностикум.  Формали-низированные эритроциты  в  50%-ной  концентрации  трехкратно  отмывают0,9%-ным физиологическим раствором центрифугированием при 400 g 10 мин.После чего концентрация эритроцитов доводится до 2,5%.     На 1000  мл диагностикума берется 50 мг танина,  2 л буфера рН 7,2(фосфатного),  все смешивается и энергично встряхивается 10 мин.  Послечего производится осаждение и двукратное отмывание эритроцитов на цент-рифуге при том же режиме.  Ресуспензируют фосфатным буфером (рН 6,4) до1 л.  Затем на 1000 мл эритроцитов (2,5%) добавляют 250 мг БСА, переме-шивают и помещают в термостат на 24 ч при 37 град. Цельсия, перемешива-ют не менее 5 раз. После инкубирования добавляют 10 мл формалина, пере-мешивают и помещают в термостат на 30 мин. После этой процедуры отмыва-ют  физиологическим  раствором (рН 7,2) два раза,  затем ресуспензируютбуфером рН 7,2 с добавлением формалина так,  чтобы в конечном  продуктесодержалось  2,5%  эритроцитов и 1%  формалина.  Для постановки реакцииобязательно применяется 0,9%-ный физиологический раствор, содержащий 1%формалина.     Подсчитывают среднеарифметическую титра гемагглютиногенов в группеи определяют их разницу по критерию Стьюдента.     Увеличение титров антител в опытных группах свидетельствует о сти-мулирующем действии их проявления вторичного иммунного ответа БАД.     г. Определение поликлональной активности В-лимфоцитов.     Активность В-лимфоцитов определяется на модели подсчета спонтанных"фоновых" клеток селезенки мышей,  продуцирующих антитела к эритроцитамбарана  (АОК)  методом локального гемолиза эритроцитов в геле.  Опытнойгруппе мышей двух линий (по три мыши) вводят БАД. На 5-7 день мышей за-бивают,  извлекают селезенки и готовят взвесь спленоцитов (концентрация100 млн.кл/мл).  Эритроциты барана отмывают 0,9%-ным раствором  хлориданатрия путем центрифугирования 7 мин. при 400 g три раза. Приготавлива-ют 0,9%-ный раствор агара "Дифко" с раствором Хенкса,  доводят рН раст-вора до 7,2 1%-ным раствором КН Ю или NaOH по цвету индикатора, находя-щегося в растворе Хенкса.  Для приготовления 10 чашек Петри  необходимо225 мг агара, 22,5 мл дистиллированной воды и 2,5 мл раствора Хенкса. Кприготовленному раствору агара добавляют отмытые эритроциты  барана  израсчета получаемой концентрации эритроцитов 20-30 млн. в 1 мл.     Полученную рабочую смесь разливают по 2,5 мл в  пробирки,  которыепомещают в водяную баню при температуре 43-44 град.  Цельсия.  В каждуюпробирку добавляют по 0,2 мл взвеси исследуемых клеток селезенки, пере-мешивают  и  выливают на чашку Петри.  Через 5-7 мин.  чашки помещают втермостат при температуре (37(+-)2) град.  Цельсия на 1 ч, затем в каж-дую  чашку  выливают  по  2,5 мл разведенного в 5 раз средой 199 сухогокомплемента морской свинки (при использовании свежезамороженного  комп-лемента  его  разводят  в 10 раз).  Чашки Петри оставляют при комнатнойтемпературе на 30 мин.  и затем подсчитывают макроскопически число  зонгемолиза  в каждой чашке Петри.  Рассчитывают число клеток,  образующихантитела на селезенку и на 1 млн. ядросодержащих клеток селезенки.     Полученные результаты  в  опытных  группах  сравнивают с контролем(группа мышей, не получавшая БАД). Увеличение количества АОК после вве-дения БАД свидетельствует о поликлональной активности В-лимфоцитов.     д. Определение гиперчувствительности  замедленного  типа  (ГЗТ)  кэритроцитам барана.     Мышей одного веса,  одной линии разделяют  на  2  группы.  Опытнойгруппе  мышей вводят подкожно в межлопаточную область эритроциты баранав дозе 10 млн.  клеток на одну мышь в объеме 0,1 мл.  Одновременно "peros"  этим  же мышам вводят БАД.  Вторая группа мышей - интактная.  На 5день всем мышам обеих групп в подушечку одной задней лапки вводят  раз-решающую дозу эритроцитов барана в концентрации 1 млрд.  кл/мышь в объ-еме 0,02 мл.  В контрлатеральную подушечку лапки  в  том  же  объеме  -0,9%-ный раствор хлорида натрия.  Местную воспалительную реакцию оцени-вают через 18-20 ч путем определения веса  опытной  (Р)  и  контрольной(Pk) лапок мышей. Забивают мышей хлороформом. Отделяют лапки по выступукости ниже сочленения большеберцовой кости и выше пяточного сустава.     Интенсивность местной  реакции определяют по индексу реакции (ИР),рассчитываемому по формуле:      ИР = (Po - Pk) : Pk x 100%      Препарат, влияющий на клеточное звено иммунитета, вызывает измене-ние индекса реакции.     е. Определение фагоцитарной  активности  макрофагов  под  влияниемБАД.     Опытной группе (3-5 мышей) вводят БАД в дозе,  оптимальной для че-ловека.  Контролем служат интактные животные. От забитых животных полу-чают перитонеальный эксудат (ПЭ) путем 2-3-кратного промывания  брюшнойполости мышей средой 199,  содержащей 5 ME гепарина в 1 мл. ПЭ собираютв центрифужные пробирки,  стоящие на льду.  После центрифугирования  ПЭпри 150 g в течение 10 мин. клетки ресуспендируют в среде 199 с 10%-нойсывороткой крупного рогатого скота,  и антибиотиками (100  ев.  в  мл).Концентрацию  клеток доводят до 2 млн.кл/мл и разливают по 2 мл в чашкиПетри диаметром 40 мм.  Чашки помещают в термостат с содержанием 5% уг-лекислого газа. Через 1 ч смывают не прилипшие клетки раствором Хенкса,добавляют 2 мл среды 199 и помещают в термостат с углекислым  газом  на18-24 ч.     Объектом фагоцитоза могут служить эритроциты барана,  лабораторныештаммы Staphilococcus или любые другие микроорганизмы.     Суточные культуры живых или убитых  прогреванием  при  температуре(90(+-)2)  град.  Цельсия  микроорганизмов  отмывают  не менее трех раз0,9%-ным раствором хлорида натрия.  Определяют  концентрацию  суспензиимикробных  клеток  по стандарту оптической плотности.  Суспензию клетокразводят средой 199 до концентрации 10-20 млрд.кл/мл.     Эритроциты барана  отмывают  3-кратно  0,9%-ным  раствором хлориданатрия центрифугированием при 800 g 5 мин.  и готовят  0,5%-ную  взвесьэритроцитов в среде 199.  Наливают 1 мл среды 199 в чашки Петри с клет-ками ПЭ,  затем вносят 1 мл взвеси эритроцитов барана или микроорганиз-мов.  Через 30-60 мин. в чашки Петри наливают холодный раствор Хенкса итут же выливают,  высушивают и фиксируют клетки метанолом. Затем клеткиокрашивают азур-эозином по Романовскому-Гимзе.     При учете результатов необходимо просмотреть  под  микроскопом  неменее 200 клеток, подсчитывают фагоцитирующие клетки и количество эрит-роцитов или микробов в одном макрофаге.     Подсчитывают процент фагоцитирующих клеток и фагоцитарное число.     Результаты, полученные в опытной группе, сравнивают с контролем.     ж. Оценка  влияния БАД на продукцию растворимых медиаторов иммуно-генеза-цитокинов.     Для определения продукции цитокинов клетки селезенки (КС) мыши ин-кубируют в течение:  12-14 ч в присутствии ЛПС  для  инициации  синтезаФИО;  24 ч в присутствии конканавалина А (Кон А) или фитогемагглютинина(ФГА) для инициации синтеза ИЛ-2.  Количественное содержание  цитокиновоценивают в надосадочных жидкостях при помощи цитокин-зависимых или ци-токин-чувствительных клеточных линий.     з. Определение ФНО-.     Содержание ФНО- в исследуемых образцах надосадочной жидкости  (НЖ)КС мыши определяют по прямому лизису клеток ФНО-зависимой клеточной ли-нии L-929 (фибробласты мыши) в присутствии актиномицина D (148). Клеткипересевают  по  2030  тыс./лунка  в плоскодонные 96-луночные планшеты всреде 199 с добавлением 5%  инактивированной при 56 град. Цельсия сыво-ротки  крови  крупного  рогатого  скота  и инкубируют 24 ч при 37 град.Цельсия. Образцы НЖ вносят в микропласты в разведениях 1:2-1:16 и инку-бируют при 37 град.  Цельсия в течение 16-20 ч. Результаты реакции учи-тывают после окрашивания клеток 0,2%-ным раствором  кристалл-виолета  в2%-ном этаноле в течение 12 мин. Оптическую плотность слоя выживших ок-рашенных клеток измеряют при длине волны 540 им на  спектрофотометре  свертикальным лучом (Multiscan,  Великобритания). В качестве стандарта вданном тесте используют рекомбинантный ФНО-.  Количество ФНО- в НЖ оце-нивают в пкг/мл, используя калибровочные кривые, полученные при исполь-зовании стандарта.     и. Определение ИЛ-2.     При определении ИЛ-2 КС мыши культивируют в концентрации 5х10(6) вприсутствии 5 мкг/мл Кон А в среде RPMI-1640,  содержащей 2%  сывороткиАВ в течение 20-24 ч.  Содержание ИЛ-2 в НЖ определяют  по  способностиобразцов поддерживать пролиферацию ИЛ-зависимой цитотоксической клеточ-ной линии.     CTLL-2 (лимфоциты мыши), оцениваемую по включению Н-тимидина в ДНКклеток.  Уровень включения радиоактивной метки  определяют,  с  помощьюсцинтилляционного  бета-спектрометра.  В  качестве  контроля используютраствор рекомбинантного ИЛ-2 с известной активностью. Количество ИЛ-2 вНЖ  оценивают в МЕ/мл,  используя калибровочные кривые,  полученные прииспользовании стандарта.     к. Оценка  влияния  БАД на пролиферацию Т-лимфоцитов при циклоспо-рин-индуцированной иммунодепрессии.     Мышей самцов  линии  Balb/c  иммунизируют внутривенно эритроцитамибарана в оптимальной дозе (5x10(8)),  с целью индукции  иммунодепрессиичерез 24 ч вводят циклоспорин А внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг.  Через4 ч изучаемую БАД в различных дозах,  еще через 4 ч животных  забивают,извлекают  клетки  селезенки,  которые культивируют с Кон А (митогеном,реализующим свой эффект преимущественно на Т-клетки) в  течение  72  ч.Степень пролиферации клеток селезенки мыши оценивают по включению в ДНКлимфоцитов тимидина,  меченного тритием,  который вносят в культуру  за4-6  ч до окончания инкубации.  Количество включенного клетками изотопапосле соответствующей обработки измеряют на сцинтилляционном бета-счет-чике (149).     л. Оценка влияния БАД на гуморальный иммунный ответ.     Мышей самцов Balb/c иммунизируют внутривенно эритроцитами барана воптимальной дозе (5x10(8)), через 24 ч вводят циклоспорин А (мощный им-мунодепрессант, оказывающий свое действие преимущественно путем ингиби-ции процессов активации Т-лимфоцитов) внутрибрюшинно в дозе.  ЮО мг/кг,еще  через  4  ч  - изучаемую БАД в различных дозах (рекомендуемая дозаобязательна). На 4 сутки после иммунизации определяют число антителооб-разующих  клеток в селезенке мыши методом локального гемолиза в агароз-ном геле по JemeH Nordin (156).      Методы исследования аллергических свойств биологически активных     добавок к пище      1. Оценка влияния БАД на общую анафилактическую реакцию.     Морских свинок 200-250 г сенсибилизируют подкожно каким-либо чуже-родным белком.  Наиболее удобно использовать нормальную лошадиную сыво-ротку или бычий сывороточный альбумин в дозе 0,1 мл и 10  мг  соответс-твенно. Одновременно свинкам вводят "per оs" или внутримышечно исследу-емую субстанцию - это опытная группа животных.  Контролем служит группасвинок,  не получавшая БАД на 14-21 день после иммунизации свинкам двухгрупп внутри-сердечно,  или внутривенно вводят ту же или удвоенную дозуантигена, использованного для сенсибилизации. Реакция у животных насту-пает через 1-2 мин. Наблюдают за животными в течение 30 мин.     Оценка реакции производится по четырехплюсовой системе:     А (+) - кратковременное почесывание  носа,  взъерошивание  шерсти,падение температуры (не менее чем на 1 град.);     Б (++) - четко выраженные частые почесывания,  единичные  чихания,падение температуры;     В (+++) - спастический кашель,  боковое положение животного, отде-ление кала и мочи;     Г (++++) - спазм дыхательных путей,  конвульсивные движения, судо-роги. Животные погибают;     Д - реакция отсутствует.     Полученные результаты  в контрольной группе сравнивают с результа-тами в опытной группе.     В качестве положительного контроля используют животных, сенсибили-зированных нормальной гетерологической сывороткой и получивших разреша-ющую  дозу в те же сроки.  Одновременно разрешающую дозу испытуемой БАД"per os" вводят животным, которые предварительно получили соответствую-щий объем 0,9%-ного хлорида натрия - отрицательный контроль.     Индекс синдрома в группе вычисляют по формуле Вейгла (И):          (А x 1) + (Б x 2) + (В x 3) + (Г x 4)     И = -------------------------------------, где:                 А + Б + В + Г + Д      А, Б, В, Г, Д - число животных с данной выраженностью синдрома.     Изучаемые БАД не должны вызывать развития смертельного шока.      Изучение действия БАД на показатели окислительно-антиокислительной     системы      Общие положения      К основным внутриклеточным химическим повреждающим агентам  следу-ет,  в первую очередь,  отнести свободные радикалы, образование которыхприводит к нарушению функционирования клеточных структур,  включая био-логические мембраны.  Наибольшее значение для патологии имеют свободныерадикалы кислорода,  а также пероксид водорода.  Все эти так называемыеактивные формы кислорода образуются в большом количестве клетками-фаго-цитами,  а также могут образовываться в митохондриях и эндоплазматичес-кой  сети других клеток в условиях патологии.  Реагируя с ненасыщеннымижирными кислотами, входящими в состав мембранных липидов, радикалы ини-циируют  цепную  реакцию их перекисного окисления.  Реакции перекисногоокисления липидов (ПОЛ) тормозятся антиоксидантными  системами  клетки,благодаря  наличию  которых  скорость реакции образования гидроксильныхрадикалов и разветвления цепи окисления липидов  находится  в  пределахфизиологической нормы. Постоянное образование прооксидантов уравновеше-но той же скоростью их дезактивации  антиоксидантами.  Резкое  усилениеокислительных  процессов,  при  недостаточности системы антиоксидантнойзащиты приводит к развитию "оксидантного стресса", который рассматрива-ется как один из общих механизмов повреждения тканей организма. Реакцииокислительного стресса являются результатом  нарушения  взаимоотношениймежду  оксидантной и антиоксидантной составляющими свободно радикальныхпроцессов за счет гиперактивности или недостаточности одного из указан-ных компонентов.  В ходе реализации окислительного стресса, являющегосяреакцией организменного уровня, создаются условия для развития специфи-ческих для нервной системы патологических процессов, что в свою очередьусугубляет окислительный стресс в центральной нервной системе (151).     В связи с вышеизложенным,  БАД к пище следует изучать как по изме-нению активности ферментных систем  генерирования  свободных  радикаловкислорода и гидроперекисей, так и по изменению содержания антиоксидант-ных белков и ферментов,  обеспечивающих утилизацию активных форм кисло-рода, Н2О2 и липопероксидов.      Методы оценки действия БАД к пище на показатели перекисного     окисления липидов      Мышам-самцам линии Balb вводят 0,25 ил 7%-ного масляного  раствораСС14 - одного из сильнейших стимуляторов ПОЛ, внутримышечно или алимен-тарно, через 15-20 мин. животным "per os" вводят исследуемую БАД к пище(5 животных в группе), 5-ти мышам контрольной группы вводят аналогичныйобъем физиологического раствора.  Через 2 сут. животных забивают, выде-ляют печень и определяют продукты перекисного окисления липидов,  такиекак диеновые коньюгаты  (появляются  на  начальных  этапах  перекисногоокисления), гидроперекиси липидов (обнаруживаются на более поздних эта-пах перекисного окисления) и малоновый  диальдегид  (один  из  наиболееважных конечных продуктов перекисного окисления липидов).     а. Определение малонового диальдегида в гомогенате печени мыши.     Печень мыши  растирают  в  гомогенезаторе  Поттера  в 3 мл 0,025 Мтрис HCl (рН 7,4),  содержащей 0,175 М хлорида калия.  Гомогенат по 2,5мл  помещают  в центрифужные пробирки и осаждают белок добавлением 1 мл17%-ного раствора ТХУ (конечная концентрация 5%).  Образующийся  осадокотделяют центрифугированием в течение 10 мин.  при 4000 g. Надосадочнуюжидкость переносят в пробирки,  добавляют по  1  мл  0,8%-ного  водногораствора 2-тиобарбитуровой кислоты и помещают пробы на 10 мин.  в кипя-щую водяную баню.  В качестве  контроля  используют  пробы,  содержащиевместо надосадочной жидкости буфер (рН 7,4). После развития розовой ок-раски пробы охлаждают до комнатной температуры  и  измеряют  оптическуюплотность  при 532 им.  Количество малонового диальдегида рассчитывают,используя молярный коэффициент экстикции 1,56-10(5) см-' x М-', а полу-ченный результат выражают в молях на пробу (152).     б. Определение диеновой коньюгации полиненасыщенных высших  жирныхкислот в гомогенате печени мыши.     Печень мыши растирают в гомогенизаторе Поттера с 9 мл экстрагирую-щей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. По-лученную суспензию центрифугируют 10  мин.  при  4000  g.  Надосадочнуюфракцию переносят в пробирки и добавляют одну десятую часть объема дис-тиллированной воды.  После 2-кратного встряхивания и  расслаивания  фазотсасывают гитпановую фазу. К равным объемам по 0,5 мл добавляют этило-вый спирт в отношении 1:5-1:10.  Оптическую плотность проб измеряют при233 нм. В качестве контроля используют только экстрагирующую смесь.     Содержание диеновых коньюгатов рассчитывают,  исходя  из  величинымолярного  коэффициента  экстинкции  при  233 им для сопряженных диеновПНЖК, равного 2,2 x 10(5) см-' x М-' (152).     в. Определение гидроперекиси липидов в гомогенате печени мыши.     Печень мыши растирают в гомогенизаторе Поттера в 3 мл 0,025 М трисHCL буфера (рН 7,4), содержащей 0,175 М хлорида калия. Гомогенат по 2,0мл помещают в центрифужные пробирки и осаждают белок добавлением 0,2 мл50%-ного  раствора ТХУ (конечная концентрация 5%).  Образующийся осадокотделяют центрифугированием в течение 10 мин.  при 4000 g. 2 мл надоса-дочной жидкости доводят 96%-ным этанолом до 27 мл.  К равным объемам до27 мл добавляют 0,1 мл концентрированной соляной  кислоты  и  0,025  мл5%-ного  раствора соли Мора в 3%-ной соляной кислоте,  пробы интенсивновстряхивают. Точно через 30 с. приливают 1 мл 20%-ного раствора тиоциа-ната  аммония,  после  чего  развивается малиновая окраска.  В качествеконтроля используют пробы, содержащие 96%-ный этанол вместо НЖ. Измене-ние  оптической  плотности проводят в течение 10 мин.  после добавлениятиоцианата аммония при 480 нм. Об относительном уровне гидроперекисей вбиологическом  материале судят по величине оптической плотности при 480нм (152).      12.3. Экспериментальная схема модели на лабораторных животных           для оценки эффективности профилактического действия           парафармацевтиков -----------------------------------------------------------------------|    Вид животных    |Количество|Количество|Продолжительность|Название||                    |   групп  |животных в|      опыта      |  групп ||                    | животных |  группе  |                 |        ||--------------------|----------|----------|-----------------|--------||Крысы, мыши, кролики|    3     |    8-10  |В зависимости от |Контроль||и др.               |          |          |срока получения  |опыт-1  ||                    |          |          |модели           |опыт-2  |-----------------------------------------------------------------------     Описание экспериментальных групп:     контроль - животные находятся на общевиварном рационе или на обыч-ном полусинтетическом рационе;     опыт-1 - крысы вместе с рационом получают изучаемую БАД к пище  напротяжении одного месяца;     опыт-2 - крысы на протяжении первого месяца находятся  на  общеви-варном или обычном полусинтетическом рационе.     Через месяц от начала опыта у крыс групп опыт-1 и опыт-2  получаютмодель  патологического состояния или помещают их в экстремальные усло-вия.     Далее, используя соответствующие тесты, оценивают профилактическиесвойства изучаемой БАД.     Конкретные модели патологических и экстремальных состояний изложе-ны в приложениях к разделу "Парафармацевтики".             13. О порядке проведения клинических испытаний                 биологически активных добавок к пище      1. Клинические испытания биологически активных добавок к пище осу-ществляются,  как правило,  в контролируемых условиях стационара или  вамбулаторных условиях в специализированных учреждениях,  которые распо-лагают квалифицированными специалистами в области науки о питании или всоответствующей  области  медицины,  современным научным оборудованием,хорошей многопрофильной клинической базой и аккредитованных на проведе-ние  подобных исследований в порядке,  установленном МЗ Кыргызской Рес-публики     2. Образцы  биологически  активных  добавок к пище предоставляютсяфирмой в том количестве,  которое предусматривается программой  испыта-ния.     3. Схема проведения испытаний биологически активных добавок к пищевключает следующие этапы:     - экспериментальную и/или аналитическую оценку основных  компонен-тов  БАД к пище на основании представленной фирмой-производителем доку-ментации и результатов исследований (см. разделы 4, 5, 6);     - разработку  программ клинических испытаний биологически активныхдобавок к пище,  которая определяется,  с одной стороны,  особенностямихимического состава и предполагаемого биологического действия исследуе-мых БАД на организм,  применительно к тем нозологическим формам заболе-вания,  при  которых  использование  добавок  с  профилактической цельюпредставляется наиболее адекватным и перспективным, а с другой стороны,типом  функциональных  и метаболических нарушений,  свойственных даннойпатологии;     - определение методики проведения клинических испытаний. Для полу-чения достоверных данных о профилактическом действии БАД к пище необхо-димым условием является наличие двух групп:     основной (опытной) и контрольной.  Они могут формироваться из здо-ровых лиц или больных с определенной патологией. Группы сравнения долж-ны быть максимально сходными по половозрастному признаку,  массе  тела,пищевому статусу. В случае проведения испытаний на больных, помимо это-го учитывается степень тяжести основного заболевания,  характер сопутс-твующей  патологии.  Оценка  эффективности БАД к пище осуществляется нафоне идентичных режимов питания в опытной и контрольной группах.  Пред-почтительным  при  этом  является использование двойного слепого методаиспытаний с применением плацебо в контрольной группе. В процессе прове-дения клинических испытаний определяются органолептические свойства БАДи их переносимость,  осуществляется оценка их эффективности,  выявлениевозможных побочных эффектов;     - помимо общих клинических показателей в план исследований включа-ются  гематологические и специальные функциональные тесты,  биохимичес-кие,  микробиологические,  иммунологические и другие показатели.  Выборкритериев оценки эффективности апробируемых БАД к пище определяется ха-рактером испытуемых БАД и клинико-патогенетическими особенностями нозо-логических форм, при которых они применяются;     - продолжительность клинической апробации устанавливается в  зави-симости от типа БАД к пище и по согласованию с фирмой-заявителем;     - в заключении по итогам испытания БАД  должны  быть  представленырезультаты изучения переносимости БАД,  ее эффективности, рекомендуемаядозировка БАД, показания к применению, возможные побочные эффекты.      Клиническая оценка эффективности БАД к пище и их переносимости      1. Оценка органолептических свойств БАД и их переносимости.     Изучение органолептических свойств БАД осуществляется с  использо-ванием анкетно-опросного метода. Оценивается вкус, запах, цвет, консис-тенция БАД, наличие посторонних запахов и т.д.     Переносимость БАД  оценивается  путем  клинического  наблюдения посубъективным и объективным признакам. Исследуется:     - состояние кожных покровов;     - системы пищеварения;     - сердечно-сосудистой системы и других органов и систем организма.     2. Оценка БАД по общеклиническим показателям:     - определение росто-весовых параметров (с  использованием  индексаКегле);     - определение других антропометрических показателей (измерение ок-ружности плеча, талии, бедер);     - определение тощей и жировой массы тела (по показаниям);     - оценка влияния БАД на общее состояние наблюдаемого контингента исостояние различных органов и систем организма;     - общий анализ мочи и крови;     - определение биохимических показателей - содержание  в  сывороткекрови общего белка, холестерина, билирубина, глюкозы, активности алани-наминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, креатинина, азота мочеви-ны.     Все исследования осуществляются в динамике, как минимум 2 раза, доприменения БАД и после завершения курса лечения.     3. Перечень дополнительных специальных тестов,  используемых,  приклинических испытаниях различных типов БАД.      3.1. Биологически активные добавки к пище - источники белка и          аминокислот -----------------------------------------------------------------------|                    Показатель                      |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в сыворотке крови:                       |                ||Общий белок                                         |       (24)     ||----------------------------------------------------|----------------||Белковые фракции (альбумины глобулины)              |      (26-27)   ||----------------------------------------------------|----------------||Креатинин                                           |       (100)    ||----------------------------------------------------|----------------||Азот мочевины                                       |       (101)    ||----------------------------------------------------|----------------||Мочевая кислота                                     |       (102)    ||----------------------------------------------------|----------------||Отдельные аминокислоты (по показаниям)              |       (133)    ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в моче (по показаниям)                   |                ||Креатинин                                           |       (100)    ||----------------------------------------------------|----------------||Азот мочевины                                       |       (101)    ||----------------------------------------------------|----------------||Отдельные аминокислоты                              |       (23)     ||----------------------------------------------------|----------------||Балансовые исследования обмена белка (по показаниям)|       (24)     |-----------------------------------------------------------------------      3.2. Биологически активные добавки к пище - источники липидов.          Биохимические показатели -----------------------------------------------------------------------|                    Показатель                      |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в сыворотке крови                        |                ||Общий холестерин                                    |      (103)     ||----------------------------------------------------|----------------||Триглицериды                                        |      (104)     ||----------------------------------------------------|----------------||Пипопротеиды высокой плотности (по показаниям)      |    (107, 108)  ||----------------------------------------------------|----------------||Липопротеиды низкой и очень низкой плотности (по    |    (107, 108)  ||показаниям)                                         |                ||----------------------------------------------------|----------------||Продукты перекисного окисления липидов (по          |      (110)     ||показаниям) малоновый диальдегид, диеновые коньюгаты|                ||----------------------------------------------------|----------------||Аполипопротеины Ai, В (по показаниям)               |      (133)     ||----------------------------------------------------|----------------||Показатели антиоксидантной защиты организма (по     |                ||показаниям):                                        |                ||ферменты (каталаза, супероксиддисмутаза,            |(36, 35, 42,    ||глутатионпероксидаза, глютатионредукгаза) витамин А,|109, 111, 133)  ||витамин Е, витамин С, SH-группы, селен              |                ||----------------------------------------------------|----------------||Эссенциальные жирные кислоты (по показаниям)        |       (28)     ||Жирно-кислотный состав тромбоцитов и эритроцитов    |       (31)     ||(по показаниям)                                     |                ||Содержание и состав фосфолипидов в тканях (по       |       (32)     ||показаниям)                                         |                |-----------------------------------------------------------------------      3.3. Биологически активные добавки к пище - источники углеводов -----------------------------------------------------------------------|                    Показатель                      |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в сыворотке крови                        |                ||Гликемия натощак                                    |     (57, 58)   ||----------------------------------------------------|----------------||Гликемический профиль                               |     (57, 58)   ||----------------------------------------------------|----------------||Гликемические кривые с нагрузкой (по показаниям)    |     (57, 58)   ||----------------------------------------------------|----------------||Триглицериды (по показаниям)                        |       (104)    ||----------------------------------------------------|----------------||Гликозилированный гемоглобин (по показаниям)        |       (105)    ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в моче                                   |                ||Содержание глюкозы в суточном количестве мочи       |     (56, 57)   ||----------------------------------------------------|----------------||Реакция на ацетон (по показаниям)                   |       (119)    |-----------------------------------------------------------------------      3.4. Биологически активные добавки к пище, содержащие пищевые          волокна (ПВ)      При оценке БАД, содержащих пищевые волокна, используются:     - изучение характера стула;     - капрологическое исследование;     - инструментально-графические тесты,  характеризующие моторно-эва-куаторную функцию желудочно-кишечного тракта (по показаниям) (128);     - микробиологический  анализ  для характеристики изменений в 1 ки-шечной микрофлоре под влиянием БАД (по показаниям) (125);     - дуоденальное  зондирование  с  определением  химического составажелчи (по показаниям):  концентрация холестерина,  холевой кислоты, де-зоксихолевой кислоты, фосфолипидов (124);     - микробиологический анализ желчи (по показаниям);     - изучение аноректического эффекта БАД;     - биохимические показатели:-----------------------------------------------------------------------|                    Показатель                      |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в сыворотке крови                        |                ||Холестерин                                          |      (103)     ||----------------------------------------------------|----------------||Билирубин                                           |       07)      ||----------------------------------------------------|----------------||Щелочная фосфатаза                                  |       (98)     ||----------------------------------------------------|----------------||Глюкоза (по показаниям)                             |     (57, 58)   ||----------------------------------------------------|----------------||Витамины группы B, C (по показаниям)                |   (35, 38, 39) ||----------------------------------------------------|----------------||Фолиевая кислота (по показаниям)                    |       (35)     ||----------------------------------------------------|----------------||Минеральные вещества (по показаниям)                |     (35, 41)   ||----------------------------------------------------|----------------||Липиды в кале (по показаниям)                       |      (120)     |-----------------------------------------------------------------------      3.5. Биологически активные добавки к пище - источники витаминов      При изучении эффективности БАД, основными компонентами которых яв-ляются витамины,  критерием оценки служит динамика изменения витаминнойобеспеченности организма под влиянием этих БАД к пище по содержанию ви-таминов в сыворотке крови и выделению их с мочой.      3.6. Биологически активные добавки к пище - источники          минеральных веществ      Эффективность этой  категории БАД к пище подтверждается путем изу-чения динамики изменения концентрации соответствующих микро- или макро-элементов  в биологическом материале,  а также тех биологических эффек-тов,  которые реализуются в организме в процессе накопления вводимых  сБАД нутриентов.     Так, эффективность содержащих железо БАД определяется по показате-лям гемоглобинового и транспортного фонда железа:-----------------------------------------------------------------------|        Показатели в периферической крови           |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Гемоглобин                                          |      (106)     ||----------------------------------------------------|----------------||Количество эритроцитов                              |      (106)     ||----------------------------------------------------|----------------||Цветной показатель                                  |      (106)     ||----------------------------------------------------|----------------||Концентрация железа в сыворотке крови               |    (41, 121)   ||----------------------------------------------------|----------------||Коэффициент насыщения грансферрина (по показаниям)  |      (106)     ||----------------------------------------------------|----------------||Трансферрин (по показаниям)                         |       (43)     ||----------------------------------------------------|----------------||Церулоплазмин (по показаниям)                       |       (43)     |-----------------------------------------------------------------------      3.7. Биологически активные добавки к пище с эубиотическим          действием на основе чистых культур микроорганизмов      Исследование влияния биологически активных добавок к пище на  мик-робиоценоз  кишечника  проводят  с  использованием питательных сред дляучета основных групп микроорганизмов:-----------------------------------------------------------------------|  Исследуемые группы и отдельные роды,  |      Питательные среды     ||          виды микроорганизмов          |                            ||----------------------------------------|----------------------------||Анаэробные микроорганизмы (общее        |Кровяной агар (I Н - среда) ||количество)                             |                            ||----------------------------------------|----------------------------||Аэробные микроорганизмы (общее          |Кровяной агар               ||количество)                             |                            ||----------------------------------------|----------------------------||Бифидобактерии                          |Бактофок; Среда Блаурокка;  ||                                        |кукурузно-лактозная среда   ||----------------------------------------|----------------------------||Лактобациллы                            |Среда МРС, обезжиренное     ||                                        |молоко                      ||----------------------------------------|----------------------------||Энтеробактерии                          |Среда Эндо, среда Плоскирева||                                        |и другие                    ||----------------------------------------|----------------------------||Условно-патогенные                      |Цитратный агар              ||(цитратассимилирующие) энтеробактерии   |                            ||----------------------------------------|----------------------------||Стафилококки                            |Желточно-солевой агар       ||----------------------------------------|----------------------------||Staph. aureus                           |Baird-Parker                ||----------------------------------------|----------------------------||Стрептококки (общее количество)         |Кровяной агар               ||----------------------------------------|----------------------------||Энтерококки: faecalis и faecium         |Молочная среда с            ||                                        |полимиксином                ||----------------------------------------|----------------------------||Сульфитредуцирующие клостридии          |Железосульфитная среда      ||----------------------------------------|----------------------------||Дрожжеподобные грибы                    |Среда Сабуро                ||----------------------------------------|----------------------------||Дрожжеподобные грибы рода Candida       |Рисовый агар                |-----------------------------------------------------------------------     Литературный источник: (112, 113).      4. Парафармацевтики, оказывающие влияние на состояние организма в        целом и состояние отдельных его систем      При исследовании воздействия парафармацевтиков,  оказывающих влия-ние на функциональное состояние организма в целом и отдельных его  сис-тем, используются методы врачебного контроля, характеризующие клиничес-кое состояние пациентов, и соответствующие инструментально-лабораторныепоказатели.     4.1. Парафармацевтики,  оказывающие влияние на центральную и пери-ферическую нервную систему.     а. Показатели, характеризующие психоэмоциональный статус пациента.     б. Влияние на сон.     в. Динамика артериального давления и пульса.     4.2. Парафармацевтики,  влияющие  на  состояние сердечнососудистойсистемы.     - Динамика артериального давления и частоты пульса.     - Электрокардиографическое исследование.     - Холтеровское мониторирование - по показаниям.     - Эхокардиография (по показаниям).     Лабораторные тесты:-----------------------------------------------------------------------|                    Показатели                      |  Литературный  ||                                                    |     источник   ||----------------------------------------------------|----------------||Содержание в сыворотке крови                        |                ||Фибриноген                                          |      (114)     ||----------------------------------------------------|----------------||Фибринолитическая активность                        |      (114)     ||----------------------------------------------------|----------------||Протромбиновый индекс и другие показатели системы   |      (114)     ||гемакоагуляции                                      |                ||----------------------------------------------------|----------------||Холестерин                                          |      (103)     ||----------------------------------------------------|----------------||Триглицериды                                        |      (104)     ||----------------------------------------------------|----------------||Лиропротеиды низкой и очень низкой плотности (по    |      (133)     ||показаниям)                                         |                ||----------------------------------------------------|----------------||Аполипопротеины A1, В (по показаниям)               |      (133)     ||----------------------------------------------------|----------------||Липопротеиды высокой плотности                      |   (107, 108)   ||----------------------------------------------------|----------------||Продукты ПОЛ (малоновый диальдегид,  диеновые       |      (110)     ||коньюгаты) (по показаниям)                          |                ||----------------------------------------------------|----------------||Показатели антиоксидантной защиты организма         |(35, 36, 42,    ||(глутатионредуктаза, глутатионпероксидаза,          |109, 111, 133)  ||каталаза; супероксиддисмутаза, витамин А, Е, С,     |                ||БН-группы трансферрин, селен) (по показаниям)       |                |-----------------------------------------------------------------------     4.3. Парафармацевтики, оказывающие влияние на пищеварительную сис-тему.     Тесты, характеризующие состояние желудка:     - Изучение желудочной секреции (по показаниям).     а. "Тонкий зонд с нагрузкой" (пентагастрин,  инсулин, гистаминпен-тагастрин + глютамат натрия).     б. рН-метрия  (2-3-точечная,  24-часовое исследование на переноси-мость и реактивность пищи и ферментных препаратов).     в. Радиотелеметрия.     г. Рентгеноскопия желудка и 12-перстной кишки (по показаниям).     - Эзофагогастродуоденоскопия  (по  показаниям).  Забор биопсийногоматериала на морфологию,  содержимое желудка на цитологию, исследованиена наличие хеликобактериоза.     - Исследование моторики пищевода и желудка (по показаниям).     Тесты, характеризующие состояние кишечника:     - Пассаж бария по тонкой кишке (транзит) (по показаниям).     - Ирригоскопия (по показаниям).     - Гептороманоскопия (по показаниям).     - Колоноскопия (по показаниям) (еюноперфузия).     - Исследование кишечного транзита радионуклидным методом (по пока-заниям).     - Копрологическое исследование кала (по показаниям).     - Микробиологическое исследование кала на дисбактериоз.     - Исследование моторики кишечника инструментально-графическим  ме-тодом (по показаниям).     Тесты, характеризующие состояние поджелудочной железы:     - УЗИ поджелудочной железы (по показаниям).     - Эндоскопическая холангопанкреатикография (по показаниям).     - Исследование  в сыворотке крови и,  моче панкреатических фермен-тов; в дуоденальном содержимом (по показаниям).     - Сцинтиграфия, сканирование поджелудочной железы (по показаниям).     4.4. Парафармацевтики, обладающие желчегонными, гепатопротекторны-ми свойствами.     - Изучение желчевыделительной функции  гепатобилиарной  системы  сиспользованием  дуоденального  зондирования  и  определения химическогосостава желчи (по показаниям) (124).  Холецистографическое исследование(по показаниям) для изучения динамики двигательной функции желчного пу-зыря под влиянием БАД к пище.     - УЗИ желчного пузыря и печени.     - Микробиологический анализ желчи (по показаниям).     - Сцинтиграфия печени (по показаниям) (124).     - Сканирование печени (по показаниям) (124).     - Пункциональная биопсия печени (по показаниям).                        Биохимические показатели -----------------------------------------------------------------------|           Содержание в сыворотке крови             |  Литературный  ||                                                    |    источник    ||----------------------------------------------------|----------------||Холестерин                                          |      (103)     ||----------------------------------------------------|----------------||Билирубин (прямой, непрямой)                        |       (97)     ||----------------------------------------------------|----------------||Аланинаминотрансфераза                              |       (92)     ||----------------------------------------------------|----------------||Аспартатаминотрансфераза                            |       (92)     ||----------------------------------------------------|----------------||Щелочная фосфатаза                                  |       (98)     ||----------------------------------------------------|----------------||Амилаза                                             |      (115)     ||----------------------------------------------------|----------------||Тимоловая проба                                     |      (116)     ||----------------------------------------------------|----------------||Сулемовая проба                                     |      (116)     ||----------------------------------------------------|----------------||Гаммаглютаминтранспептидаза (по показаниям)         |      (133)     ||----------------------------------------------------|----------------||Гаммаглютаминтрансфераза (по показаниям)            |      (123)     ||----------------------------------------------------|----------------||Альдолаза (по показаниям)                           |       (94)     ||----------------------------------------------------|----------------||Глютаматдегидрогеназа (по показаниям)               |      (122)     |-----------------------------------------------------------------------     4.5. Парафармацевтики, обладающее диуретическими свойствами.     - Определение суточного диуреза.     - Контроль за уровнем артериального давления.     - Определение концентрации калия и натрия в сыворотке крови, эрит-роцитах и моче (по показаниям).     - Определение кислотно-основного состояния крови (по показаниям).     - Показатели системы свертывания крови (по показаниям).     - Электрокардиографическое исследование в динамике.     4.6. Парафармацевтики,  обладающие общеукрепляющим и противовоспа-лительным действием.     По показаниям  изучается состояние гуморального и клеточного имму-нитета, интенсивность процессов перекисного окисления липидов и показа-тели антиоксидантной защиты организма.     Показатели гуморального иммунитета -  количество  В-клеток  (СД19,СД20).     Иммуноглобулины основных классов (JgA, JgM, JgG) (132). Показателиклеточного  иммунитета - фенотипирование Т-клеток (СДз - общий Т - лим-фоцитов СД4 - хелперы, СД8 - цитотоксические клетки супрессоры) (132).     Неспецифический иммунный  ответ  - компоненты системы комплемента,определение числа фагоцитирующих клеток и фагоцитарного индекса,  гене-рация супероксидного аниона нейтрофилами (02*) (132).     4.7. Критерии анорексигенной активности БАД.     Оценка биологически  активных добавок к пище анорексигенного дейс-твия осуществляется по степени выраженности  специфического  эффекта  идинамике массы тела.     Критерии анорексигенной активности БАД.     Объективная оценка  чувства  голода  проводится  каждый день передприемом пищи в одно и то же время одним и тем же врачом по  специальнойшкале: невыносимый голод - 5 баллов, голод с чувством "беспокойства - 4балла, чувство голода - 3 балла, еда с аппетитом - 2 балла" еда без ап-петита - 1 балл, отвращение к еде - 0 баллов.     О выраженности анорексигенного действия можно  судить  по  частотеприема БАД в течение дня.     Степень потери массы тела оценивается по коэффициенту потери массытела от исходной величины до лечения (ПИ). Коэффициент рассчитывается вконце курса лечения по следующей формуле:            Е     ПИ = --- x 100%, где:           Т      Е - потеря массы тела;     Т - исходная масса тела.     При исследовании анорексигенного действия БАД необходима  проверкана  отсутствие  в  их  составе  эфедрина  и  других  психостимулирующихсредств.  Метод определения эфедрина изложен в  приложениях  к  данномуразделу.     5. Биологически активные добавки к пище  могут  быть  разрешены  кприменению без проведения клинических испытаний на основании экспертизынеобходимой документации:     а) при  наличии  представленных  фирмой-изготовителем  материалов,свидетельствующих о клинических испытаниях  эффективности  предлагаемойБАД;  клинические  испытания  должны быть выполнены в уполномоченных напроведение таких исследований учреждениях в Кыргызской Республике и/илистране-изготовителе;     б) если БАД содержит отдельные нутриенты и их комплексы в дозиров-ке  уже  установленной и апробированной для этого вида БАД в КыргызскойРеспублике;     в) если парафармацевтики содержат изученные и уже использующиеся вклинической практике растительные компоненты в дозах, установленных дляБАД в Кыргызской Республике.     Решение о необходимости проведения клинических испытаний  принима-ются, если:     а) фирмой-заявителем направляется на сертификацию  БАД  без  соот-ветствующей документации,  подтверждающей ее эффективность результатамипроведенных клинических испытаний;     б) БАД содержит новые действующие ингредиенты;     в) требуется разрешение к применению в связи с новыми показаниями,новой дозировкой, изменением состава, а также в случае изменения в тех-нологическом регламенте.                                                       Приложение 1                                               к разделу "Нутрицевтики"                 Биологически активные добавки к пище -                     источники белка и аминокислот      Показатели и методы оценки эффективности -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |               Метод            |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Аминокислотный состав  |Исследования проводятся         |    (24)    ||нутрицевтика с         |на автоматических анализаторах  |            ||отдельным изучением    |аминокислот                     |            ||триптофана и           |                                |            ||серосодержащих         |                                |            ||аминокислот            |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Биологическая ценность |Исследования проводятся в       |    (24)    ||и усвояемость БАД к    |эксперименте на крысах с        |            ||пище                   |изучением скорости роста молодых|            ||                       |животных или расчетом           |            ||                       |аминокислотного скора           |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Общий белок            |Унифицированный метод по        |    (25)    ||                       |биуретовой реакции              |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Альбумин               |Унифицированный метод с         |    (26)    ||                       |бромкрезоловым зеленым          |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Белковые фракции       |Унифицированный метод           |    (27)    ||(альбумины, глобулины) |электрофоретического разделения |            ||                       |на пленках из ацетата целлюлозы |            |-----------------------------------------------------------------------                                                           Приложение 2                                               к разделу "Нутрицевтики"            Биологически активные добавки к пище - источники               липидов (эссенциальные и неэссенциальные                       липидные компоненты пищи)      Определение содержания липидных компонентов в БАД к пище -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Эссенциальные жирные   |ГЖХ-жирных кислот               |     (28)   ||кислоты                |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Фосфолипиды            |ВЭЖХ                            |     (29)   ||-----------------------|--------------------------------|------------||Стерины                |Хромато-масс-спектрометрический |     (30)   |-----------------------------------------------------------------------      Определение липидных компонентов в биологических жидкостях     (эффективность усвоения) -----------------------------------------------------------------------|                     Показатели                   |   Литературный   ||                                                  |     источник     ||--------------------------------------------------|------------------||Жирно-кислотный состав тромбоцитов и эритроцитов  |        (31)      ||--------------------------------------------------|------------------||Содержание и состав фосфолипидов в тканях         |        (32)      |-----------------------------------------------------------------------                                                       Приложение 3                                               к разделу "Нутрицевтики"                 Биологически активные добавки к пище -                          источники углеводов      Показатели и методы оценки эффективности и качества -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Углеводы в БАД к пище  |ВЭЖХ                            |    (56)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Исследования           |Спектрофотометрический          |  (57, 58)  ||гликемических кривых   |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Дисахариды в слизистой |                                |    (59)    ||кишечника              |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Экспериментальная      |                                |    (60)    ||оценка                 |                                |            ||гипогликемического     |                                |            ||действия в опытах на   |                                |            ||животных               |                                |            |-----------------------------------------------------------------------                                                       Приложение 4                                               к разделу "Нутрицевтики"                 Биологически активные добавки к пище -                          источники витаминов      Определение содержания витаминов в БАД к пище -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин А и каротиноиды|ВЭЖХ                            |    (33)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин Е м.           |ВЭЖХ                            |    (33)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин Д              |ВЭЖХ                            |    (33)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин C (аскорбиновая|Метод визуального титрования 2,6|    (34)    ||кислота)               |дихлорфенолиндофенолом          |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B1             |Флуориметрический тиохромный    |    (35)    ||                       |метод                           |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B2             |Флуориметрический (титрование   |    (38)    ||                       |рибофлавинсвязывающим апобелком)|            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин РР             |Флуориметрический метод         |    (35)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B6             |ВЭЖХ                            |    (33)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B12            |Радиоиммунологический           |    (35)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Фолиевая кислота       |Радиоиммунологический метод     |    (35)    ||                       |конкурентного связывания        |            |-----------------------------------------------------------------------      Определение содержания витаминов в биологических средах -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин А и каротиноиды|ВЭЖХ                            |    (36)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин E              |ВЭЖХ                            |    (36)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин C (аскорбиновая|Метод визуального титрования 2,6|    (35)    ||кислота)               |дихлорфенолиндофенолом          |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B1             |Определение коэффициента        |    (35)    ||                       |активации транскелолазы         |            ||                       |эритроцитов колориметрическим   |            ||                       |методом (в крови),              |            ||                       |спектрофотометрическим (в моче) |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B2             |Флуориметрический (титрование   |    (38)    ||                       |рибофлавинсвязывающим апобелком)|            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин РР             |Флуориметрический метод (в крови|    (40)    ||                       |и моче)                         |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Витамин B6             |ВЭЖХ (в крови и моче)           |    (39)    |-----------------------------------------------------------------------                                                           Приложение 5                                               к разделу "Нутрицевтики"                 Биологически активные добавки к пище -                     источники минеральных веществ      Определение содержания минеральных веществ в БАД к пище -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Кальций                |Визуальное титрование с         |    (35)    ||                       |кальцеином                      |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Фосфор неорганический  |Колориметрический               |    (35)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Натрий, калий, магний, |Атомно-абсорбционный            |    (41)    ||железо, цинк, медь,    |                                |            ||хром, молибден         |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Селен                  |Спектрофлюориметрический        |    (42)    |-----------------------------------------------------------------------      Определение минеральных веществ в биологических средах -----------------------------------------------------------------------|      Показатель       |             Метод              |Литературный||                       |                                |  источник  ||-----------------------|--------------------------------|------------||Кальций                |Визуальное титрование с         |    (35)    ||                       |кальцеином (кровь, моча)        |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Фосфор неорганический  |Колориметрический               |    (35)    ||-----------------------|--------------------------------|------------||Натрий, калий, магний, |Атомно-абсорбционный (кровь,    |    (41)    ||железо, цинк, медь,    |моча)                           |            ||хром, молибден         |                                |            ||-----------------------|--------------------------------|------------||Селен                  |Спектрофлюориметрический        |    (42)    |-----------------------------------------------------------------------                                                           Приложение 6                                               к разделу "Нутрицевтики"               Оценка эффективности биологически активных                   добавок к пище, содержащих железо      Экспериментальные исследования на крысах -----------------------------------------------------------------------|Количество|Количество|Экспериментальные|Продолжительность| Исходная  ||  групп   |  крыс в  |     группы      |      опыта      |   масса   ||  крыс    |  группе  |                 |                 |  крыс, г  ||----------|----------|-----------------|-----------------|-----------||    3     |   8-10   |контроль         |2-3 месяца       |    30-50  ||          |          |опыт-1           |                 |           ||          |          |опыт-2           |                 |           |-----------------------------------------------------------------------     Описание групп крыс:     - контроль - контрольная группа крыс находится на обычном полусин-тетическом рационе;     - опыт-1 и опыт-2 - у этих групп животных создается модель алимен-тарной железодефицитной анемии. Для этого крысы этих групп рассаживают-ся в специальные клетки (пластмассовые клетки без каких-либо  железосо-держащих  составляющих  с  прорезями внизу,  что исключает копрофагию укрыс) и получают корм,  из которого полностью исключено железо (при не-обходимости отдельные компоненты полусинтетического рациона максимальноотмывают от железа).  Состав экспериментального рациона:  казеин - 22%,подсолнечное  масло (рафинированное - 10%,  кукурузный крахмал - 60,7%,целлюлоза - 3%,  солевая смесь - 0,1% (без добавления железа), витамин-ная смесь - 0,1%, холинхлорид - 0,1%. С подсолнечным маслом в корм вно-сится ретинолпальмитат и витамин Д.  Весь рацион готовится на деионизи-рованной  воде  эту  же  воду в ходе эксперимента используют в качествепитьевой воды.  Скорость и  глубину  развития  железодефицитной  анемииконтролируют,  определяя концентрацию гемоглобина в периферической кро-ви.  При снижении концентрации гемоглобина ниже 90 г/л считается, что уживотных  имеется железо-дефицитная анемия.  Для ее подтверждения частьживотных из группы опыт-1 забивают и определяют:  концентрацию гемогло-бина в периферической крови, концентрацию железа в сыворотке крови, об-щую железосвязывающую способность сыворотки крови и рассчитывают  коэф-фициент насыщения трансферрина,  содержание железа в сыворотке в печеникрыс, количество эритроцитов в периферической крови, мазок крови на на-личие анизо- и пойкилоцитоза. При подтверждении железодефицитной анемииживотным группы опыт-2 в корм вносят исследуемую биологически  активнуюдобавку к пище (с соответствующим расчетом на содержание железа). Восс-тановление статуса железа в организме крыс в дальнейшем  ходе  экспери-мента оценивают по концентрации гемоглобина,  в крови. При восстановле-нии концентрации гемоглобина в крови до величин,  имеющих место у конт-рольной группы животных,  экспериментальных животных забивают и опреде-ляют гематологические и биохимические показатели,  характеризующие сос-тояние обмена железа в организме.  Важно определить содержание железа впечени, т.к. этот показатель характеризует запасы железа в организме.                                                           Приложение 7                                               к разделу "Нутрицевтики"                 Биологические активные добавки к пище,           способствующие выведению из организма чужеродных             и токсичных веществ, продуктов обмена веществ -----------------------------------------------------------------------|          Показатель          |          Метод          |Литературный||                              |                         |  источник  ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение содержания        |Спектрофотометрический   |     (46)   ||цигохрома                     |                         |            ||Р-450 в органах               |                         |            ||экспериментальных животных    |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности        |Спектрофотометрический   |     (47)   ||о-демитилирования амидопирина |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности        |Спектрофотометрический   |     (48)   ||о-демитилирования             |                         |            ||р-нитроанизола                |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение гидроксилирования |Спектрофлюориметрический |     (49)   ||3,4 бензпирена                |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение о-диэтилирования  |Спектрофлюориметрический |     (50)   ||7-этоксикумарина              |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение о-диэтилирования  |Спектрофлюориметрический |     (51)   ||7-этоксирезофурина            |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности        |Спектрофотометрический,  |     (52)   ||лизосомальных ферментов:      |спектрофлюориметрический |            ||арил-сульфатазы А и В,        |                         |            ||бета-галак-гозидаза,          |                         |            ||бета-глюкуронидаза,           |                         |            ||альфа-маннозидаза,            |                         |            ||бета-N-ацетилглюкозаминидаза в|                         |            ||сыворотке крови и органах     |                         |            ||лабораторных животных         |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности        |Спектрофлюориметрический |     (53)   ||эпоксидгидролазы в            |                         |            ||субклеточных фракциях печени и|                         |            ||слизистой тонкой кишки        |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности У ДР - |                         |     (54)   ||глюкуронозиягрансферазы       |                         |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Определение активности        |Спектрофотометрический   |     (55)   ||карбоксилэстеразы в           |                         |            ||субклеточных фракциях и       |                         |            ||слизистой тонкой кишки        |                         |            |-----------------------------------------------------------------------                                                     Приложение 1                                           к разделу "Парафармацевтики"           Оценка эффективности биологически активных добавок              к пище, применяемых в качестве ингибиторов                      образования N-нитрозаминов      Известно, что  наличие в пищевых продуктах азотсодержащих соедине-ний (аминов,  амидов,  алкилмочевин и др.), а также нитратов и нитритовможет  приводить к образованию канцерогенных N-нитрозаминов как в пище-вом продукте,  так и в организме,  причем компоненты, входящие в составпищевого продукта,  могут усиливать,  замедлять или полностью ингибиро-вать этот процесс.  БАД к пище,  являющиеся в основном  высокоактивнымисоединениями,  могут играть важную роль как в экзогенном, так и в эндо-генном образовании канцерогенных N-нитрозаминов.  В связи с этим оценкаактивности  применяемых БАД к пище как ингибиторов образования канцеро-генных N-нитрозаминов имеет важное значение.                   Оценка эффективности ингибирования                  нитрозирования в условиях IN VITRO      В среду,  состоящую  из  5  мл  натурального  желудочного  сока pH0,8-1,0, 0,5 мл водного раствора нитрита натрия (концентрация 30 мг/мл)и  0,5  мл диэтиламина (концентрация 46,7 мг/мл),  вносят 1 мл раствораБАД к пище (БАД к пище  растворяется  в  соответствующем  растворителе,концентрация  БАД выбирается в зависимости от рекомендуемой дозировки),энергично перемешивают до полного растворения,  доводят рН раствора  до4,5  добавлением 0,1 н раствора соляной кислоты или 0,1 н раствора гид-роокиси натри. Контрольный опыт проводят аналогично, но вместо раствораБАД к смеси желудочного сока и предшественников нитрозаминов добавляет-ся 1 мл соответствующего растворителя.  Смеси (опыт и контроль) термос-татируются при 37 град. Цельсия в течение 30 мин. Реакцию останавливаютдобавлением 0,1 н раствора гидроокиси натрия (рН  8-9).  Образовавшиесянитрозамины извлекают из смеси экстракцией свежеперегнанным метиленхло-ридом.     Объединенные экстракты  высушивают  прокаленным  сульфатом магния,концентрируют и проводят  идентификацию  и  количественное  определениенитрозаминов хемилюминисцентным методом (80) и (41).                 Оценка эффективности ингибирования нитрозирования                          в условиях IN VIVO -----------------------------------------------------------------------|    Вид животных    |Количество| Исходная  |Количество|Название групп||                    |   групп  |   масса   | животных |   животных   ||                    | животных |животных, г| в группе |              ||--------------------|----------|-----------|----------|--------------||Крысы, самцы        |     2    |  100-150  |    10    |Контроль опыт |-----------------------------------------------------------------------     Крысы обеих групп (контроль и опыт) находятся на полусинтетическомрационе.  Каждому животному контрольной и опытной группы натощак вводятжелудочным зондом последовательно по 1 мл водных растворов нитрита нат-рия (в пересчете на нитрит ион) и диэтиламина в дозах соответственно 15и 24 мг/кг массы крысы. Животным опытной группы помимо предшественниковвводят 1 мл БАД к пище.  Животным контрольной группы 1 мл соответствую-щего растворителя,  используемого для растворения БАД к пище. Ровно че-рез 30 мин.  после введения растворов всех животных забивают,  отделяютжелудок вместе с содержимым,  помещают в жидкий азот. Анализ N-нитроза-минов осуществляют хемилюминисцентным методом (81) и (41).                         Нитрозопролиновый тест -----------------------------------------------------------------------|    Вид животных    |Количество| Исходная  |Количество|Название групп||                    |   групп  |   масса   | животных |   животных   ||                    | животных |животных, г| в группе |              ||--------------------|----------|-----------|----------|--------------||Крысы, самцы        |     2    |  100-150  |    10    |Контроль опыт |-----------------------------------------------------------------------     Крысы обеих групп находятся на полусинтетическом рационе.     Контроль -  крысам  натощак  вводят  1 мл водных растворов нитританатрия и пролина в дозах соответственно 15 и 50 мг/кг массы тела живот-ного. Опыт - крысам помимо нитрита натрия и пролина вводят натощак 1 млраствора БАД к пище.  Крыс обеих групп помещают в  обменные  клетки  насутки  для сбора мочи,  предварительно в сосуды для сбора мочи вносят 1мл 30%-ного раствора гидроксида натрия.  Собранную мочу замораживают доминус  18  град.  Цельсия  и хранят до проведения анализа на содержаниенитрозопролина (не более 10 дней). Содержание нитрозопролина определяютпо (79).                                                         Приложение 2                                           к разделу "Парафармацевтики"              Оценка влияния биологически активных добавок               к пище, предлагаемых в качестве защитных                  средств от ионизирующего излучения      Экспериментальные исследования на крысах -----------------------------------------------------------------------|   Количество   |   Количество   |Экспериментальные|Продолжительность||     групп      |    животных    |      группы     |      опыта      ||    животных    |    в группе    |                 |                 ||----------------|----------------|-----------------|-----------------||       2        |       10       |Контроль опыт    |30 дней          |-----------------------------------------------------------------------     Модель воздействия ионизирующего излучения.     Крысы контрольной  и опытной групп получают однократное общее гам-ма-облучение в дозе 8 Гр на установке "Хизотрон" с источником Со  (Е  -1,25  МэВ) с расстояния 0,7 м.  После облучения контрольная группа крыснаходится на обще-виварном рационе.  Крысы опытной группы получают исс-ледуемую БАД к пище вместе с кормом.     Ежедневно регистрируется гибель животных, взвешивание производитсякаждые трое суток.             Характеристика проницаемости кишечного барьера              (экспериментальные исследования на крысах)  -----------------------------------------------------------------------|   Количество   |   Количество   |Экспериментальные|Продолжительность||     групп      |    животных    |      группы     |      опыта      ||    животных    |    в группе    |                 |                 ||----------------|----------------|-----------------|-----------------||       2        |       10       |Контроль опыт    |15-18 дней       |-----------------------------------------------------------------------     Модель воздействия ионизирующего излучения.     Крысы контрольной  и опытной групп получают однократное общее гам-ма-облучение в дозе 4 Гр на установке "Хизотрон" с источником Со  (Е  -1,25 МэВ) с расстояния 0,7 м.     Данная доза не вызывает гибели животных в ранний период и характе-ризуется  обратимыми изменениями в морфофункциональном состоянии эпите-лиального барьера тонкой кишки.  Животные опытной группы на  протяжении10-14 дней перед облучением и в течение 2 суток после облучения получа-ют с кормом исследуемую БАД к пище. Животные контрольной группы на про-тяжении всего эксперимента получают общевиварный рацион.     Через сутки,  после облучения животным опытной и контрольной группвводят внутрижелудочно, по 500 мг ПЭГ-4000 (Serva, Германия) и собираютмочу в течение последующих 18 ч в обменных клетках.  По окончании сборамочи  крысам внутрижелудочно вводят по 500 мг куриного овальбумина (пя-тикратно перекристаллизованного) и через 3 ч обескровливают под  глубо-кой эфирной анестезией. Препарат слизистой оболочки тощей кишки подвер-гают морфометрическому исследованию на светооптическом уровне.     Из аликвоты мочи экстрагируют ПЭГ-4000 путем экстракции 10-кратнымобъемом перегнанного хлороформа.  Хлороформ отгоняют  и  сухой  остатоканализируют  методом  гель - проникающей хроматографии с рефрактометри-ческим детектированием в  системе  метанол-вода  1:1  (88).  СодержаниеПЭГ-4000  в  пробах  определяют по стандартному графику.  Параллельно вдругой аликвоте мочи анализируют содержание креатинина с помощью  коло-риметрической  реакции  ЯФФЕ (89).  Проницаемость кишечного барьера дляПЭГ-4000 характеризуют величиной экскреции ПЭГ-4000 с мочой в процентахот  введенной дозы в расчете на 11 ммоль экскретируемого креатинина.  Всыворотке крови анализируют  содержание  антигенных  структур  куриногоовальбумина  с  помощью  двухвалентного твердофазного иммуноферментногометода (sandwich-ELISA), рекомендуемого как официальный метод ВОЗ (90).     Проницаемость кишечного барьера для нерасщепленного белка характе-ризуется величиной его всасывания в кровь в процентах от внутрижелудоч-но введенной дозы.                                                         Приложение 3                                           к разделу "Парафармацевтики"             Оценка эффективности БАД к пище, рекомендуемых              для профилактики и вспомогательной терапии                        при заболеваниях печени      Экспериментальное исследование на крысах с использованием модели     подострого токсического гепатита -----------------------------------------------------------------------|Количество|Количество крыс|    Контроль   |  Опыт-1 |     Опыт-2     ||групп крыс|   в группе    |               |         |                ||----------|---------------|---------------|---------|----------------||    3     |       16      |Общевиварный   |Модель   |Модель гепатита ||          |               |рацион         |гепатита |на фоне введения||          |               |               |         |изучаемой БАД   |-----------------------------------------------------------------------     Модели подострого гепатита:     - крысам вводится подкожно четыреххлористый углерод в дозе 2 мл/кгмассы крысы в смеси с подсолнечным маслом 1:1 через день на  протяженииодного месяца (91);     - пятикратное через 2 ч введение (внутримышечное) 50%-ного раство-ра  тетрахлорметана  в  оливковом  масле по 0,3 мл на 0,1 кг массы телакрысы (82).     Опыт-1 -  1-й месяц крысы находятся на общевиварном рационе первые3 недели,  далее - получение модели токсического гепатита (срок в зави-симости от вида модели); 2-3-й месяц - на общевиварном рационе.     Опыт-2 - 1-й месяц крысы находятся на общевиварном рационе с  вве-дением в него изучаемой БАД к пище первые три недели, далее - получениемодели токсического гепатита (срок в зависимости от вида модели); 2-3-ймесяц  - на общевиварном рационе с введением в него изучаемой БАД к пи-ще.     Контроль -  1-й,  2-й и 3-й месяцы крысы находятся на общевиварномрационе.     Забои животных  проводятся:  1-й  забой (забивают половину крыс изкаждой группы, 6-8 животных) сразу после получения модели гепатита, 2-й-  через  3-4  недели  после первого забоя (вторая половина животных изкаждой группы).     Экспериментальные исследования,  рекомендуемые  для оценки данноговида БАД:  интегральные показатели,  т.е.  внешний вид животных, актив-ность, масса тела, абсолютная и относительная масса внутренних органов.                        Биохимические показатели -----------------------------------------------------------------------|          Показатель          |          Метод          |Литературный||                              |                         |  источник  ||------------------------------|-------------------------|------------||Аланинаминотрансфераза        |Спектрофотометрический   |    (92)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Сорбитолдегидрогеназа         |Спектрофотометрический   |    (93)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Альдолаза                     |Спектрофотометрический   |    (94)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Орнитинкарбомоилтрансфераза   |Спектрофотометрический   |    (95)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Холинэстераза                 |Спектрофотометрический   |    (96)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Билирубин                     |Унифицированный метод    |    (97)    ||                              |по диазореакции в        |            ||                              |присутствии акселератора |            ||------------------------------|-------------------------|------------||Щелочная фосфатаза            |Спектрофотометрический   |    (98)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Лактатдегидрогеназа           |Спектрофотометрический   |    (99)    ||------------------------------|-------------------------|------------||Белковые фракции              |Электрофорез             |    (27)    |-----------------------------------------------------------------------     Морфологические методы: макро- и микроскопическое исследование пе-чени.     Модели патологического  состояния печени представлены также в сле-дующих работах: острый тетрациклиновый гепатоз у крыс (83), хроническийгепатит (8),  цирроз печени (117),  другие модели токсического гепатита(85-86).                                                         Приложение 4                                           к разделу "Парафармацевтики"             Оценка эффективности БАД к пище, рекомендуемых             для профилактики и в качестве вспомогательных          средств при лечении сердечно-сосудистых заболеваний      Модели гиперлипиемий.     1. Крысы - введение детергентов (тритон WR-1339 225-220 мг/кг мас-сы тела внутрибрюшинно однократно). Через 8-10 ч после введения тритонаWR-1339 наблюдается 6-8 кратное увеличение уровня триглицеридов в кровии 3-4-кратное увеличение содержания холестерина (126).     2. Крысы - применение диеты, содержащей 3-5% холестирина, 0,3% ти-оурацила,  1%  холиевой кислоты.  Дополнительно можно ввести витамин Д.Гиперлипидемия  возникает через 3-4 недели.  Длительное применение этойдиеты с витамином Д (несколько месяцев) приводит к атеросклеротическомупоражению аорты (126).     3. Морские свинки - применение диеты,  содержащей 1,6% холестиринаи 15%  растительного масла. Через 6-10 дней развивается гиперлипидемия,усиливающаяся при более длительном применении диеты (126).     4. Кролики - применение диеты, содержащей 0,2-0,3 г/кг холестеринаили введение холестерина зондом в подсолнечном масле в желудок в том жеколичестве (126).     При изучении БАД к пище, рекомендуемой в качестве вспомогательногоили  профилактического средства при лечении сердечно-сосудистых заболе-ваний, в эксперименте на животных можно рекомендовать следующие показа-тели для характеристики эффективности:     - интегральные показатели состояния животных - внешний вид, актив-ность, масса тела, относительная масса внутренних органов;     - специальные показатели - артериальное давление,  электрокардиог-рафическое исследование.                        Биохимические показатели -----------------------------------------------------------------------|                  Показатели                     |    Литературный   ||                                                 |      источник     ||-------------------------------------------------|-------------------||Фибриноген                                       |        (114)      ||-------------------------------------------------|-------------------||Фибринолитическая активность                     |        (114)      ||-------------------------------------------------|-------------------||Протромбиновый индекс и другие показатели системы|        (114)      ||гемакоагуляции                                   |                   ||-------------------------------------------------|-------------------||Холестерин                                       |        (103)      ||-------------------------------------------------|-------------------||Триглицериды                                     |        (104)      ||-------------------------------------------------|-------------------||Липопротеиды высокой плотности                   |     (107, 108)    ||-------------------------------------------------|-------------------||Продукты ПОЛ (малоновый диальдегид, диеновые     |        (110)      ||коньюгаты)                                       |                   ||-------------------------------------------------|-------------------||Показатели антиоксидантной защиты организма      |(35, 36, 42, 109,  ||(глутатионредуктаза, глутатионпероксидаза,       |111)               ||каталаза; супероксиддисмутаза, витамин А, Е, С,  |                   ||SH-группы, трансферрин)                          |                   ||-------------------------------------------------|-------------------||Аспартатаминотрансфераза (инфаркт миокарда)      |         (92)      |-----------------------------------------------------------------------     Макро- и микроскопические морфологические исследования сердца и, вслучае необходимости, сосудов.                                                             Приложение 1                                                           к разделу 13                     Определение содержания эфедрина      2-3 г препарата,  взвешенного с точностью до 0,01 г,  обрабатываютоднонормальным HCI 3 раза по 10 мл.  Из объединенного экстракта удаляютлипидные компоненты хлороформом 3 раза по 10 мл. Водный слой подщелачи-вают десятинормальным NaOH до pH 10  и  хлороформом  выделяют  эфедрин.Хлороформовый экстракт упаривают на роторном испарителе, экстракт раст-воряют в 1 мл хлороформа и 1 мкл вводят в хроматограф.     Анализ проводят  на хроматографе с пламенно-ионизационным детекто-ром на полярной колонке при температуре 120 град.  Цельсия.  В этих  жеусловиях анализируют стандартный раствор эфедрина (0,1 мг в 1 мл хлоро-форма).  Содержание эфедрина выражают в мг на 100 г препарата и рассчи-тывают по формуле:            Сст - Нпр     Спр = --------- x 1000, где:           Нст x qпр      Cпр - содержание эфедрина в препарате в мг на 100 г;     Сст - концентрация эфедрина в стандартном растворе;     Hпр - интегральный показатель пика эфедрина в препарате;     Hст - интегральный показатель пика эфедрина в стандартном  раство-           ре;     qпр - навеска препарата в г.                                 Список литературы      1. Методические указания по атомно-абсорбционным методам определе-ния токсичных элементов в пищевых продуктах  и  пищевом  сырье.  №  02,19/47-11.     2. ГОСТ 26927-86 "Сырье и продукты пищевые. Метод определения рту-ти".     3. ГОСТ 26930-86 "Сырье  и  продукты  пищевые.  Метод  определениямышьяка".     4. Методические указания по определению микроколичеств  пестицидовв продуктах питания, кормах, внешней среде: Сб. 1976, 1991. Ч. 5-18.     5. Методические указания,  по выделению, идентификации и количест-венному  определению насыщенных и моно-,  би-,  триряда полициклическихароматических углеводородов в пищевых продуктах. № 4721-88.     6. Афлатоксины В и М.  Методические указания по обнаружению, иден-тификации и определению содержания в продовольственном сырье и  пищевыхпродуктах  с  помощью  высокоэффективной  жидкостной  хроматографии.  №4082-86.     7. ГОСТ 28001-88 "Зерно фуражное, продукты его переработки, комби-корма.  Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона охра-токсина А".     8. Методические указания по обнаружению, идентификации и определе-нию содержания дезоксиниваленола и зеараленона. N 5177-90.     9. Методические указания по обнаружению, идентификации и определе-нию  содержания  Т-2  токсина  в  пищевых продуктах и продовольственномсырье. № 3184-84.     10. Методические  указания по определению остаточных количеств ан-тибиотиков в продуктах животноводства N 3049/84.     11. ГОСТ  10444.15-94 "Продукты пищевые.  Методы определения коли-чества мезофильных аэробных и  факультативно  анаэробных  микроорганиз-мов".     12. ГОСТ 50474-93 "Продукты пищевые.  Методы выявления и определе-ния  количества  бактерий  группы  кишечных палочек (колиформных бакте-рий)".     13. СанПиН  42-123-4049-88  "Микробиологические нормативы и методыанализа продуктов детского,  лечебного и диетического питания и их ком-понентов". С.54-57.     14. ГОСТ 104442-93 "Продукты пищевые.  Метод выявления и определе-ния Staphylococcus aureus".     15. ГОСТ 10444.8-88 "Продукты пищевые.  Метод определения Bacilluscereus".     16. ГОСТ 50480-93 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родаSalmonella".     17. ГОСТ 10444.12-88 "Продукты пищевые.  Метод определения дрожжейи плесневых грибов".     18. СанПиН 42-123-4940-88.  "Микробиологические нормативы и методыанализа продуктов детского,  лечебного и диетического питания и их ком-понентов" - С.71-72.     19. СанПиН 42-123-4940-88.  "Микробиологические нормативы и методыанализа продуктов детского,  лечебного и диетического питания и их ком-понентов". С.71-73.     20. СанПиН 42-123-4940-88 "Микробиологические нормативы  и  методыанализа продуктов детского,  лечебного и диетического питания и их ком-понентов". С.69-70.     21. ГОСТ 50474-93. "Методы выявления и определения количества бак-терий  группы  кишечных  палочек  (колиформных  бактерий)"   или   Сан-ПиН-42-123-4940-88  "Микробиологические нормативы и методы анализа про-дуктов детского,  лечебного и диетического питания и  их  компонентов"-С.51-54.     22. СанПиН 42-123-4940-88 "Микробиологические нормативы  и  методыанализа продуктов детского,  лечебного и диетического питания и их ком-понентов" - С.61-63.     23. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого A.A. M.: Медицина, 1969. 85 с.     24. Pellеt H.L.,  Young V.R. Nutritional Evaluation of Protein Fo-ods. The United Nations University Tokyo, Japan, 1980.     25. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией Меньшикова В.В. М.: Медицина, 1987. С.174-175.     26. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией Меньшикова В.В. М.: Медицина, 1987. С.176.     27. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией Меньшикова В.В. М.: Медицина, 1987. С.177-179.     28. Iupac. Standart metods for the analysis of oil, fats and deri-vatives. 2.302 Pergamot press, 1979.     29. Fox J.М. in phosphatidilcholine. Peeters /ed/ Springer Berlin,1976.-P.3-7.     30. Левачев М.М.,  Медведев Ф.А., Гарбузов А.Г. и др. //Прикладнаябиохимия и микробиология. 1988. № 3. С.24.     31. Левачев М.М., Корф И.И. - Журнал "Вестник" № 10 - С.17.     32. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. С. 163, 259.     33. Якушина Л.М.,  Бендер Е.Д., Харитончик Л.А. //Вопросы питания.1993. № 1. С.43-47.     34. Теоретические  и клинические аспекты науки о питании /Под ред.Волгарева М.Н. 1987. Т.8. 210 с.     35. Теоретические  и клинические аспекты науки о питании /Под ред.Волгарева М.Н. 1987. Т.8. 210 с.     36. Якушина   Л.М.,   Таранова   А.Г.  //Ж.физ.хим.  1994.  №  10.С.1826-1828.     37. Сокольников А.А.,  Коденцова В.М.,  Исаева В.А. //Вопросы мед.хим. 1993. № 3. С.50-53.     38. Коденцова В.М.; Вржесинская О.А., Рисник В.В. //Прикладная би-охимия и микробиология - 1994, № 4-5. С.603-609.     39. Коденцова В.М.,  Рисник В.В.  и др. //Клин. лаб. Диагностика -1993. № 6. С.22-27.     40. Коденцова В.М.,  Вржесинская О.А.,  Сокольников А.А. //Вопросыпитания - 1992. № 2. С.62-67.     41. МУК 4.4.1.0.11-93 "Определение летучих N-нитрозаминов в продо-вольственном сырье и пищевых продуктах".     42. МУК 4.1.033-95 "Методы контроля. Химические факторы, определе-ние селена в продуктах питания".     43. Dona V., Papagni V., Tarenghy V. et.al //J.Ital. Chim. 1987. №12. P.205-214.     44. Keller S.Schieter S.  Vc.Kednee F. //J. Immunology Meth. 1981.№ 51. P.287-291.     45. Stiglic N.  Vlohovic V.  e.tal. //Acta Рас.Меt.flumin. 1978. №15. P.15-17.     46. Omura Т., Sato R. //Biol Chem. 1964. № 239. P.2370-2377.     47. Карузина И.И., Арчаков А.И. Современные методы в биохимии. М.:Медицина, 1977. С.49-62.     48. Fuov F., Azyrv U. Kamattaki. T.et.al. //J.Pharmac. 1979. № 29.P.191-201.     49. Dehnen W. et.al. //Anal-Bioch. 1977. № 53. P.373-383.     50. Lake В.Y. //Biochem. Toxicol. 1987. P.207-209.     51. Lake B.Y. //Biochem. Toxicol. 1987. P.209-211.     52. Лингл Д. Лизосомы. Методы исследования. 1980.     53. Кравченко Л.В.,  Соболев В.С. //Бюлл. эксперим. биологии и ме-дицины - 1989 - № 8. С.179-181.     54. Book К.W. et.al. //Biochem. Рharmac. 1980. № 29. P.495-500.     55. Mendoza  C.E.  et.al.  //Comh.  Bioc.  Phesiol.  1971.  №  40.P.841-854.     56. Cheetman N.W.  et.al.  //J.  of Chromatography.  1981.  № 207.Р.439-444.     57. Любченко  П.Н.  Клиническая  лабораторная  диагностика.  1994.С.6-7.     58. Меньшиков В.В., Ванштейн В.В. //Лаб. Дело. 1984. № 5. С.84.     59. Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. С.127-131.     60. Young D.S. et. al. //J.Clinical Chemistry - 1975. V.5. P.432.     61. Госфармакопея ГФ XI. Т.1. 1989.     62. Госфармакопея ГФ XI. Т.2. 1990.     63. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологическиактивные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука, 1990.     64. Drawert F.,  Leopold  Е.  //J.Chromatogr.  1976.  V.2.  №  12.P.505-510.     65. Marine D., Belestrieri F.Ital //J.Food. 1995. 7. № 3. P.255.     66. T S.Chamble, B.Clark //J.Arg. Food Chem. 1991. 39. P.162-169.     67. Ляпков Б.Г., Воробьева Л.Ш., Медведев Ф.А. Экстракционное кон-центрирование и ХМС-определение d-лимонена в маслах цитрусовых и другихбиологических образцах //ЖАХ. Т.84. № 4. 1996. С.451-454.     68. Международная фармакопея. Изд. 3. 1990. Т.3.     69. Сборник международных методов анализа и оценки  вин  и  сусел.Пищевая промышленность, 1993.     70. Svenson J.Q.J. Chromatogr., 230 Biochem Appl 19, 427, (1982).     71. Christophersen A.S. et.al. J.Chromatogr. 168, 476, (1979).     72. Official metods of analysis of AOAC 15th ed 1990 v. 1, 2.     73. ГОСТ 9517-94 "Топливо твердое. Методы определения выхода гуми-новых кислот".     74. "Таблетки мумие экстракта, покрытые оболочкой". Временная фар-макопейная статья ВФС 68-86-93, МЗ Республики Кыргызстан.     75. Курчубеков Б.П., Нарбеков О.Н. Кыргызский горный бальзам-мумие"Архар-Таш". Бишкек, 1992.     76. ГОСТ 28038-89 "Продукты переработки плодов и овощей. Метод оп-ределения микотоксина патулина".     77. Методические рекомендации по определению нитратов и нитритов вмолоке и молочных продуктах, 1990.     78. Методические  указания  но  определению  нитратов и нитритов взерне и зернопродуктах, 1990.     79. Вопросы питания. 1997. № 4. C.16-18.     80. Вопросы питания. 1996. № 3. С.31.     81. Вопросы питания. 1994. № 4. С.32.     82. Экспериментальная  и  клиническая  фармакология.  1992.  №  6.С.49-50.     83. Макаренко Т.Н., Дудченко А.М., Лукьянова Л.Д. Разработка моде-ли  острого тетрациклинового гепатоза у крыс и получение его динамичес-ких предикторов //Бюлл.  экспериментальной биологии и медицины. 1994. №12. С.603-606.     84. In vivo correlation between liver and blood energy  status  asevidenced by chronic treatment of carbon tetrachloride and adenosine torats Hernandez-Munoz Rolando, Sanchez Victoria Chagoya //Can. J. Physi-ol. and Phannacol. 1994. 72. № 10. С.1252-1255.     85. Зимин Ю.В., Солопаева И.М. Влияние хорионического гонадотропи-на  на активность лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы патологи-чески измененной печени //Бюлл. экспериментальной биологии и медицины.1994. N 6. С.59-593.     86. Дроговоз С.М., Сальникова С.И. Эффективность оксикоричных кис-лот при токсических поражениях печени //Бюлл.  экспериментальной биоло-гии и медицины. 1993. № 2. С.55-57.     87. Конопля  Е.Н.,  Прокопенко Л.Г.  Эссециале как иммуномодуляторпри токсическом поражении печени //Экспериментальная и клиническая фар-макология. 1992. № 6. С.49-50.     88. Гмошинский И.В.,  Радченко С.Н., Зорин С.Н., Мазо В.К. Коррек-ция  диетой  проницаемости  защитного барьера кишки при гамма-облучении(Физиол. журн. им.И.М.Сеченова. 1996. Т. 82. № 3. С.117-124.     89. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С. 62-63, 103.     90. Stuart С.A.,  Twistelton R.,  Nicholas М.К., Hide D.W. Passageof cows milk proteins in breast milk //Clin.Allergy.  1984.  V.14. № 6.P.533-535.     91. Шамсудинов Ш.Н.  Физиологическая  эффективность  травы  полыниэстрагона при некоторых экстремальных условиях:  Автореферат на соиска-ние ученой степени кандидата биологических наук.     92. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С.118.     93. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С.156.     94. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С.144.     95. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С.124.     96. Биохимические методы исследования в клинике /Под ред. Покровс-кого А.А. М.: Медицина, 1969. С.179.     97. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.227.     98. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.207.     99. Лабораторные  методы  исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.177.     100. Биохимические  методы  исследования в клинике /Под ред.  Пок-ровского А.А. М.: Медицина, 1969. С.103.     101. Биохимические  методы  исследования в клинике /Под ред.  Пок-ровского А.А. М.: Медицина, 1969. С.98-101.     102. Биохимические  методы  исследования в клинике /Под ред.  Пок-ровского А.А. М.: Медицина, 1969. С.102.     103. Биохимические  методы  исследования в клинике /Под ред.  Пок-ровского А.А. М.: Медицина, 1969. С.300.     104. Биохимические  методы  исследования в клинике /Под ред.  Пок-ровского А.А. М.: Медицина, 1969. С.294.     105. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.238.     106. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.107-122.     107. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией. В.В.Меньшикова. М.: Медицина 1987. С.248.     108. Фенотипирование  гиперлипидемий:  Методические  рекомендации.Под ред. Климова А.Н. - 1975.     109. Zanetti  G.  Rabbit liver glutation reductase.  Purrificationand  properties  //Arch.  biochem  and  biophys.  1979.  V.198.  №   1.Р.241-246.     110. Иргашев Ш.Б.,  Юлдашев Н.М.,  Гурнев С.Б.,  Хадиметова  Ш.А.,Эльмуратов М.Т. Процессы гидроксилирования и интенсивность ПОЛ в микро-сомах печени при экспериментальном инфаркте  миокарда  //Патологическаяфизиология и экспериментальная терапия. 1993. N 3. С.19-20.     111. Wendel A.Glutathion peroxidase //Method in Ensymol -  1989  -V.77. P.325-333.     112. Применение бактерийных биологических  препаратов  в  практикелечения больных кишечными инфекциями, диагностика и лечение дисбактери-оза кишечника: Методические рекомендации. М., 1986.     113. Диагностика и диетотерапия пищевой аллергии: Методические ре-комендации. М., 1984.     114. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.155-172.     115. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подредакцией В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.191.     116. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.179.     117. Патологическая  физиология  и  экспериментальная терапия № 4.С.38-39.     118. Оценка  физической  работоспособности  //Экспериментальная  иклиническая фармокология. 1992 - N 2. С.39-41.     119. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.47-59.     120. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.66-79.     121. Лабораторные  методы исследования в клинике:  Справочник /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.267-270.     122. Покровский А.А.,  Арчаков А.И. Методы разделения и ферментнойидентификации субклеточных фракций.  В кн.: Современные методы в биохи-мии. М.: Медицина, 1968 - С.5-59.     123. Лабораторные методы исследования в клинике:  Справочник  /Подред. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С.192-194.     124. Морфологическая  диагностика  заболеваний  печени  /Под  ред.В.В.Серова. М.: Медицина, 1989. С.336.     125. Кресноголовец  В.Н.  Дисбактериоз  кишечника.  М.:  Медицина,1989. С.208.     126. Экспериментальное изучение гиполипидемических и  антиатероск-леротических средств:  Методические рекомендации, Фармакологический Ко-митет. М., 1988.     127. СанПиН  2.3.2.560-96  "Гигиенические  требования к качеству ибезопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.     128. Кишковский Н.А.  Дифференциальная диагностика в гастроэнтеро-логии. М.: Медицина, 1984. С.288.     129. Коллинз  У.П.  Новые  методы иммуноанализа.  М.:  Мир,  1991.С.140-149.     130. Пол У. Иммунология. М.: Мир, 1987. Т.1. С.93-96.     131. Фримель Г.  Иммунологические методы исследования. М.: Медици-на, 1987. С.4.     132. Методы исследования в иммунологии /Под  ред.  Лефковиц  И.  иПернис Б. Т. 1, 2.     133. Тиц Н.  Энциклопедия клинических лабораторных тестов. М.: Ла-бинформ, 1997.     134. Тутельян В.А.  Биологически активные добавки к пище: прошлое,настоящее,  будущее //Тезисы второго Международного симпозиума. Питаниеи здоровье. Биологически активные добавки к пище - С.164-166.     135. Пыцкий  В.И.  -  В  кн.:  Патологическая физиология /Под ред.А.Д.Адо и В.В.Новицкого - С.73-75.     136. Крыжановскин Г.Н.,  Магаева С.В., Макаров С.В. Нейроиммунопа-тология. М., 1997. С.7.     137. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробио-логических исследованиях. Л., 1962.     138. Крендаль Ф.П.,  Левина Л.В.,  Чубарев В.Н. и др. Фармакологи-ческое исследование адаптогенного (резистогенного) действия настойки избиомассы культуры ткани корня женьшеня.  - В кн.: Новые данные об элеу-терококке и других адаптогенах - С.123-130.     139. Меерсон Ф.З.  Механизмы и защитные эффекты адаптации.  В кн.:Адаптационная медицина. М., 1993. С.25-31.     140. Горизонтов П.Д. Гомеостаз, его механизмы и значение. Гомеотаз/Под ред. Горизонтова П.Д. М.: Медицина, 1981. С.5-28.     141. Меерсон  Ф.З.  Основные закономерности индивидуальной адапта-ции. В кн.: Физиология адаптационных процессов: Руководство по физиоло-гии. Наука, 1986. С.10-76.     142. Меерсон Ф.З. Общий механизм адаптации и роль в нем стресс-ре-акции,  основные стадии процесса.  В кн.: Физиология адаптационных про-цессов: Руководство по физиологии. Наука, 1986. С.77-123.     143. Петров  А.В.,  Быков  Э.Г.  Методологические аспекты проблемыадаптации. Формы и механизмы процессов адаптации. В сб. научных трудов:Формы и механизмы процессов адаптации в норме и патологии - С.5-29.     144. Beutler В., Ceram A. The biology of cachectin. TNF-a primariymediator  of  the  host response //Annu.  Rev.  Jmmunol.  1989.  Vol.7.P.625-655.     145. Beutle В.,  Cerami A.  Tumor necrosis,  cachexia,  shock, andinflammation:  a common mediator //Annu.  Rev.  Biochem.  1988. Vol.57.P.505-518.     146. Beuler В.,  Greenwald D., Hulmes J.D. et. al. Identity of tu-mor  necrosis factor and the macrophage-secreted factor cachectin //Na-ture. 1985. Vol. 316. P.552-554.     147. Гублер Е.В.,  Генкин А.А. Применение непараметрических крите-риев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., 1973. С.97.     148. Fisch  H.,  Gifford  J.E.  A photometric and plaque assay formacrophage mediated tumor  cell  cytotoxity  //J.Immunol.  Meth.  1983.Vol.57. Р.311-325.     149. Ковальчук Л.В.,  Константинов А.А.,  Павлюк А.С.  Клиническоезначение  фактора  роста  Т-клеток  (интерлейкинов для оценки иммунногостатуса человека //Иммунология. 1986. Т.4. С.52-55.     150. Jerne  N.К.,  Nordin A.A.  Plaque formation in agar by singleantibody production //Science. 1963. Vol.140. P.405.     151. Завалишин И.А., Захарова М.Н. Оксидантный стресс. - общий ме-ханизм  повреждения  при  заболеваниях  нервной  системы.  1996.   Т.2.С.11-114.     152. Орехович В.Н.  Современные методы в биохимии. Медицина, 1977.С.62-69.     153. Кондратенко И.В., Ярилин А.А., Хахалин Л.Н. Исследование про-дукции  интерлейкина-2  лимфоцитами больных с иммунодефицитами (сравни-тельная характеристика различных методов тестирования) //Иммунология  -1991. Т.6. С.77-80.     154. Петров Р.В., Павлюк А.С., Ковальчук Л.В. и др. Интерлейкинза-висимые иммунодефициты человека //Иммунология, 1987. Т.4. С.20-24.     155. Ebert Е.С.,  Stoll D.В., Cassens В.J. et al Diminished inter-leukin  2  production and receptor generation characterize the acquriedimmunodeficiency syndrome.  Clin.  Immunol.  Immunopatol. 1985. Vol.37.P.283-297.     156. Цезий-137. Определение в пищевых продуктах: Методические ука-зания 5779-91. Свидетельство МА МВИ ИБФ № 15/1-89.     157. Стронций-90.  Определение в пищевых  продуктах:  Методическиеуказания 5778-91. Свидетельство МА МВИ ИБФ № 14/1-89.